抗体依赖性细胞吞噬作用

抗体依赖性细胞吞噬作用 (ADCP) 是一种免疫消除机制，其凭借单克隆抗体 (mAb) 靶向肿瘤细胞，以促进吞噬免疫细胞将肿瘤细胞从体内清除。这使得肿瘤细胞特异性 mAb 成为一种有吸引力的抗癌治疗的候选药物，并且几种疗法已经获得批准（例如曲妥珠单抗，它是治疗 Her-2 阳性乳腺癌的常用药物）。

这些疗法的作用机制 (MoA) 既依赖于它们结合巨噬细胞或单核细胞上的 Fc 受体 (FcR) 的能力，也依赖于它们与肿瘤细胞上过表达的抗原的特异性结合。在抗体开发过程中，通过体外分析表征分子诱导各种 MoA（包括 ADCP）的能力至关重要，以指示其治疗潜力。测定 ADCP 的传统技术通常：

使用采集通量较低的仪器，需要大体积的样品（例如，传统流式细胞仪）
费力费时，需要优化方案、固定和反复洗涤等步骤
仅提供定性读数或需要手动进行数据分析
测量误差较多，而非定量真实的 ADCP 信号
依赖表达基因工程报告基因的细胞系

iQue^® 的 ADCP 利用 iQue^® 人抗体依赖性细胞吞噬作用试剂盒，通过精简的工作流程对活靶细胞与 CD14+ 原代效应细胞的共定位进行定量，实现 ADCP 的高通量测定。利用 iQue^® 高通量流式细胞仪的强大功能与自动化集成分析，获得靶向测试抗体对 ADCP 影响的瞬时药理学数据。

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概念

图 1. iQue^® 人抗体依赖性细胞吞噬作用试剂盒分析原理示意图。

在 96 孔板或 384 孔板中，将 iQue^® 增殖和编码（B/绿色）染料标记的靶细胞与测试抗体共孵育，然后加入未标记的效应细胞（PBMC 或富集的单核细胞或巨噬细胞群）。

使用 iQue^® 细胞膜完整性（R/红色）染料分离活细胞与死细胞。将根据靶细胞编码器呈阳性的活的 CD14+ 效应细胞的百分比对 ADCP 进行定量。

该试剂盒中使用的荧光团组合意味着它与 iQue^® BR 和 VBR 配置兼容。

获得定量数据

生成适用于药理学分析的可重现、特异性的 ADCP 测定值。

图 2.使用 ForeCyte^® 进行高效数据分析，可自动计算 EC₅₀，获得药物效价排序

将 B/Green 标记的 Ramos 细胞（2500 个细胞/孔）与 PBMC（效应细胞/靶细胞比为 20:1）一起接种到 96 孔板中。用一系列不同的利妥昔单抗 mAb 亚型刺激 ADCP，这些亚型包括：IgG1、IgG1NQ（非糖基化）、IgG2 和 IgG4。使用 iQue^® 抗体依赖性细胞吞噬作用试剂盒标记细胞，并使用 iQue^® 3 对 ADCP 进行分析。ADCP (%) 是指活细胞群中 CD14 和 B/Green 编码 + 细胞的百分比。

1.Invivogen：用于细胞生物学研究的试剂和工具。

实现高通量分析

在 96 孔或 384 孔板中使用经验证的试剂快速定量 ADCP，促进您的发现。

图 3.在单个 384 孔板中，分析在多种效应细胞/靶细胞比条件下来自多例供体的 PBMC 的 ADCP 效应。

将非贴壁的 Ramos 靶细胞（2500 个细胞/孔）与 Truxima (CD20-IgG1) 和 PBMC 以 5:1、10:1 和 20:1 的效应细胞/靶细胞比共孵育。利用不含抗体的孔作为阴性对照。使用 iQue^® 人抗体依赖性细胞吞噬作用试剂盒和 iQue^® 3 对 ADCP 进行评估。

(A) 为 ADCP (%) 热图；(B) 和 (C) 分别为来自供体 1 和 2 的 PBMC 的 ADCP (%) 浓度响应曲线。

分析生理相关的细胞模型

利用原代效应细胞对各种贴壁或非贴壁靶细胞的 ADCP 进行评估。

图 4.使用灵活的共培养模型区分治疗药物对贴壁靶细胞的吞噬作用。

将 B/Green 编码的贴壁 AU565 细胞（10000 个细胞/孔）与曲妥珠单抗 (Her2-IgG1 mAb) 和分离的单核细胞（效应细胞/靶细胞比为 5:1）共孵育。使用 iQue^® 人抗体依赖性细胞吞噬作用试剂盒标记细胞，并使用 iQue^® 3 进行分析。

(A) ForeCyte^® 直方图的样品板视图，显示了 ADCP 事件（CD14+ B/Green+ 活细胞）随曲妥珠单抗浓度的增加而增加。

(B) 与对照抗体 (BGal-IgG1) 相比，曲妥珠单抗处理后 ADCP (%) 增加。

最大程度地提高分析效率

通过实时数据分析和新颖的可视化工具，缩短获得结果的时间

图 5a.利用 iQue^® 采集样品时，将自动填充预设的圈门模板。

将 iQue^® 人抗体依赖性细胞吞噬作用试剂盒随附的模板导入 iQue^® ForeCyte^®，以提供与 CD14+ 单核细胞共定位的 B/绿色编码靶细胞的即时定量结果。与简单的 3 步圈门策略结合的单个细胞门，可确保测定真实的 ADCP 信号。

图 5b.利用 iQue^® ForeCyte^® 软件进行自动化数据分析，可提供即时的 ADCP 读数。

应用圈门模板后，可使用简便易用的 iQue^® ForeCyte^® 分析平台进行药理学分析，同时以简单、清晰的格式显示结果。数据可视化的示例包括：

(A) 轮廓线图，包含 CD14 阳性细胞群的清晰圈门；(B) 包含 Ramos 或 Raji 靶细胞的 PBMC 对 Truxima 的 ADCP (%) 响应热图；(C) 来自 (B) 的数据，以浓度响应曲线表示。对于 Ramos 和 Raji，从 iQue^® ForeCyte^® 直接导出的 EC50 值分别为 29.1 ng/mL 和 24.8 ng/mL。