可固定活力染料
在评估细胞的治疗应答时，为了将死细胞排除在最终数据分析之外，确定细胞活力十分重要。当通过流式细胞术进行细胞内免疫分型时，采用可固定活力染料染色并在固定后依然可以保持染色图案，对于正确识别细胞群至关重要。目前有许多固定活力染色法可用于量化细胞活力，但是这些方法与固定方案不兼容，最终可能导致在数据集中出现伪影。
借助 iQue® 可固定活力染料，用户可以通过从细胞标记到分析的简化工作流程，在使用 96 孔板进行固定和/或透化后对样品中的细胞活力进行准确的评估。通过细胞内流式细胞术工作流程获得准确细胞活力信息从此易如反掌！
应用
检测原理
iQue® 可固定活力染料是一种区分活细胞和死细胞的氨基活性不透膜染料。染色的细胞可以固定和透化，使染料与下游细胞内染色相容，并且强度不会有任何减弱。
经过验证，iQue® 可固定活力分析试剂盒可在 iQue® 平台上使用 BR 和 VBR 配置运行。用户可以使用从细胞标记到分析的简化工作流程，对细胞活力、细胞表面和细胞内靶点进行定量分析。iQue® 可固定活力分析试剂盒有三种不同颜色可供选择，可以满足流式多色 Panel 的需求。为便于使用，分析试剂盒中包含了用于设门策略和分析的预置模板。
基本工作流程：
- 使用不含蛋白的 PBS 清洗细胞
- 使用在不含蛋白的 PBS 中稀释的染料对细胞染色 20-30 分钟
- 如果需要，执行下游染色方案（表面标志物染色、固定/透化、细胞内染色）
- 在 iQue® 平台（采用 BR 和 VBR 配置）上分析样品板
关键优势
固定后保留染色 - 在固定或透化后保持荧光染色强度，从而区分活细胞和死细胞
对细胞内靶点进行无伪影分析 - 监测表面和细胞内标志物的表达，同时减少来自死亡细胞的伪影
节省宝贵的样品 - 节省样品，只需要 20 µL 细胞即可完成多项下游检测
固定后保留染色
在固定或透化后没有任何染色强度损失，可保留荧光性能以区分活细胞和死细胞。
图 1.在经过固定/透化的细胞和非固定细胞中使用 iQue® 可固定活力染料进行荧光染色的对比图。
用 iQue® 可固定 V/蓝色 (A)、B/绿色 (B) 或 R/红色 (C) 染料对存活的和经过热处理（65°C，10 分钟）的 Jurkat 死亡细胞的混合物进行染色。染色后的细胞使用 3.7% 的甲醛和 0.1% 的皂苷 PBS 溶液进行固定和透化，其中部分未被固定。用户可使用 iQue® 仪器采集所有样品的数据，并使用分析试剂盒中包含的预置模板导出门内单细胞的柱状图。
实现无伪影的细胞内靶标分析
最大限度地减少死亡细胞产生的潜在伪影，同时分析细胞表面和细胞内标志物的表达。
图 2.iQue® 可固定活力染料染色的 PBMC 的细胞内 IFN-γ 表达检测和分析实例。
将 PBMC 在 CD3 抗体包被样品板（含有 10 ng/mL 人重组 IL-2）中培养两天。测定前 4 小时，将蛋白质转运抑制剂莫能菌素 (2 µM) 添加到细胞培养物中。向 96 孔检测板的每个孔中加入已活化的 PBMC (20 µL)，用 iQue® 可固定活力（V/蓝色）染料染色，然后用 T 细胞表面标志物 CD3 染色。接下来将细胞固定并用 Cytofix/Cytoperm 溶液 (BD Biosciences) 透化，再用 PE 偶联的小鼠抗人 IFN-γ 抗体染色。样品采集和数据分析分别使用 iQue® 仪器和 Forecyt 软件。A，所有细胞的设门。B，单细胞的设门。C，用 iQue® 可固定活力（V/蓝色）染料染色排除死细胞。D，CD3+ 活细胞中的 IFN-γ 表达图示。
节省宝贵的样品
节省样品，仅需 20 µL 细胞即可完成多个下游分析。
图 3.易于遵循的小样品量（20 µL/孔）方案可节省细胞并缩短设置时间
订购信息
| 平台：兼容 iQue® 3/iQue® Screener Plus - VBR 和 BR 配置 | |||
| 产品 | 规格 | 产品目录号 | |
| iQue® 可固定活力（V/蓝色）分析试剂盒 | 5 x 96 孔 | BA-97116 | |
| iQue® 可固定活力（B/绿色）分析试剂盒 | 5 x 96 孔 | BA-97119 | |
| iQue® 可固定活力（R/红色）分析试剂盒 | 5 x 96 孔 | BA-97122 | |
