使用高通量流式细胞仪分析自然杀伤细胞的活性

支持在生理相关模型中研究 NK 细胞介导的肿瘤细胞杀伤作用。

图 2.在共培养分析中定量自然杀伤细胞介导的抗体依赖性细胞毒性、细胞因子/蛋白释放和标志物表达。编码的 Raji 肿瘤细胞（2 × 10⁴ 个/孔）与来自两个单独供体的 PBMCs（2 × 10⁵ 个/孔）共培养。PBMCs 分别与以下三个抗 CD20 抗体之一共同孵育：Ab-1 (IgG1)、Ab-2 (IgG1) 或阴性对照 Ab-3 (IgA2)。浓度范围在 10 μg/mL - 0.128 ng/mL 之间。

4 小时后，使用人 NK 细胞杀伤分析试剂盒和 iQue^® 3 分析 10 µL 样品，以评估肿瘤细胞杀伤情况，同时还使用 iQue^® 人 NK 细胞配套试剂盒测定了颗粒酶 A。

(A,B) 来自两个供体的靶细胞杀伤对抗体的响应不同。(C,D) 两个供体细胞颗粒酶 A 的产生都呈现出浓度和供体依赖性。(E,F) 自然杀伤细胞的 CD16+ 表达随着刺激的增加而降低。

图 3.通过细胞因子刺激的 NK 介导的直接肿瘤细胞杀伤也可以进行定量。将编码的 K562 肿瘤细胞（2×104 个/孔）与富集的（阴性选择）人 NK 细胞共培养，人 NK 细胞已在单独培养基（非活化 NK 细胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 细胞）的培养基中孵育 16-18 小时，效靶比为 5:1。 在 4 小时和 24 小时后，使用 iQue^® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒和 iQue^® 3 对 10 µL 样品进行分析，以评估肿瘤细胞的杀伤作用。

(A) 直方图显示了靶细胞在与非活化或细胞因子激活的 NK 细胞共培养 4 小时后的活性。(B,C) 图中汇总了在与非活化或细胞因子激活的 NK 细胞共培养 (B) 4 小时或 (C) 24 小时后死亡肿瘤细胞的百分比。

在细胞和微球混合分析中同时测定效应细胞标记物的表达和分泌效应蛋白的含量。

图 4.使用细胞表型分析和细胞因子分泌分析检测 NK 活化的不同状态。将编码的 K562 肿瘤细胞（2×10⁴ 个/孔）与富集的（阴性选择）人 NK 细胞共培养，人 NK 细胞已在单独培养基（非活化 NK 细胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 细胞）的培养基中孵育 16-18 小时，效靶比为 1:1 或 5:1。在共培养 24 小时后，取出 10 µL 样品，使用 iQue^® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒和 iQue^® 3 进行分析。

(A) 活化标志物（CD69 和 CD25）的表达情况。(B) IFNg 的产生和颗粒酶 B 的分泌情况。 (C) 将 iQue^® 人 NK 细胞配套试剂盒和 iQue^® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒相结合，对其他额外的细胞因子进行平行评估。 NK = 自然杀伤细胞。T = K562 肿瘤靶细胞。

IL-2 和 IL-15 活化后，多种效应蛋白（如颗粒酶 B 和 CCL5 (RANTES)）的表达和分泌增加。这些作用在靶细胞和 NK 细胞共培养时进一步增强。

实时的数据分析和创新的可视化工具可实现快速的数据采集。

图 5.iQue^® ForeCyt^® 上的预先设门和多种分析功能可实现人 NK 细胞的自动表型分析。

(A) 使用阳性和阴性孔在未活化的 NK 细胞（阴性；红色）vs. 细胞因子活化的 NK 细胞（阳性；绿色）上创建 CD69 表达的叠加图示例。(B) 显示每个孔中 CD69+ 细胞百分比的微孔板热图示例。(C) 描述 NK 细胞上 CD69 表达的叠加直方图示例。 （Non-act.NK = 未活化的 NK 细胞，Act.NK = 细胞因子活化的 NK 细胞，T = 靶标癌细胞）。

将传统工作流程压缩并简化为微量化取样的单个小型化多重分析。

图 6. 使用清晰易懂的方案，分析 NK 细胞介导的肿瘤细胞杀伤作用，同时使用 iQue^® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒评估 NK 细胞的活化状态和细胞因子的释放。