T 细胞活化

抗原和共刺激信号对初始 T 细胞的活化启动了 CD4+ 辅助 T 细胞和 CD8+ 细胞毒性 T 细胞的克隆扩增。除 T 细胞增殖外,多个信号通路被激活,引起功能性细胞表面标志物的表达和细胞因子的释放。

研究免疫系统靶向癌症治疗(双特异性抗体、检查点抑制剂抗体及 CAR-T 细胞)的市场正在不断增长。T 细胞活化分析的监测和定量能够帮助我们更好地理解 T 细胞如何对某些刺激作出响应,从而深入洞察药物如何利用免疫系统的强大作用。

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检测原理

在单个孔中,通过多重方法评估 T 细胞活化、增殖和细胞因子释放。

图 1.人 T 细胞活化分析试剂盒的分析原理示意图。不同 T 细胞表型分析主要通过检测 3 个活化标志物的表达:CD69(早期)、CD25(晚期)和 HLA-DR(更晚期)。还可以使用 2-plex Qbeads,通过夹心法免疫分析,在同一孔中定量分析 2 种效应细胞因子(IFNγ 和 TNFα)。您可以同时测定 T 细胞增殖或编码的靶细胞,但本示意图中未包含此分析。

关键优势

在生理相关的模型中洞察 T 细胞活化状态的更多生物学信息

图 2. 激酶抑制剂筛选突出显示了人 T 细胞活化分析中的差异。

使用一组激酶抑制剂 (20 µM) 处理 PBMCs 1 小时。然后加入 CD3/CD28 Dynabead 刺激活化 24 小时。使用 T 细胞活化和细胞因子分析试剂盒联合 iQue® 系统分析 10 µL 样本。

(A) CD4+CD69+ 设门策略孔板视图。绿色框代表仅含培养基的对照孔。红色框代表环孢菌素对照孔。黄色框代表图 B-D 中展示的化合物(1:鲁索替尼;2:双吲哚基顺丁烯二酰亚胺 I;3:AZD 7762)。

(B, C) CD4+ 和 CD8+ 细胞上 CD69、CD25 和 HLA-DR 的表达。

(D) PBMCs 释放的 IFNγ 和 TNFα 细胞因子。

同时进行表面蛋白和细胞因子表达的定量测定

图 3.对来自不同供体的 PBMC 的活化特征和细胞因子释放的差异进行定量分析。

将 SKOV-3 细胞(4 K/孔)与来自 3 个供体的 PBMCs(10 K/孔)进行共培养分析。使用 CD3/CD28 Dynabead 诱导活化。4 天后根据贴壁细胞分离方案分离细胞,并用 T 细胞活化和细胞因子分析试剂盒进行分析。(A-C) 早期 (CD69)、晚期 (CD25) 和更晚期 (HLA-DR) T 细胞活化标志物的表达。(D) 各个供体的 IFNγ 释放数据。

易于使用和解析;可使用预先设门策略

图 4.利用 iQue® ForeCyt® 上的预先设门功能进行人 T 细胞亚群的自动表型分析

最大程度减少样本操作:小体积,单次清洗,无需稀释

  • 简单的实验方案,将细胞和上清液作为一个样本,从而简化了工作流程。
  • 无需标记或进行额外的优化步骤。

图 5a. 使用清晰易懂的方案,通过 T 细胞活化分析试剂盒进行 T 细胞表型和细胞因子释放分析。

图 5b. 清晰易懂的改进方案,分析中允许包含靶细胞。可通过 T 细胞活化分析试剂盒进行 T 细胞表型和细胞因子释放分析。

订购信息

T 细胞活化分析试剂盒

平台

兼容 iQue® 3 VBR 配置

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技术资源

文献和文档

已出版书籍章节:新型多重平台

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T 细胞活化分析试剂盒产品指南

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贴壁细胞分离方案

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应用指南

使用多重 T 细胞活化分析进行激酶抑制剂表型筛选

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应用指南

采用活细胞分析和流式细胞仪联合分析免疫细胞杀伤

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用于自动液体处理系统的 iQue® 人 T 细胞活化分析试剂盒方案优化

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海报

利用免疫表型和分泌的细胞因子的多重分析进行 T 细胞活化的常规监测

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采用活细胞分析和流式细胞仪的联合工作流程表征双特异性单链抗体 (BiTE) 介导的细胞杀伤

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