T 细胞表征

图 2. T 细胞应答依赖于活化机制。 将 PBMCs（120 K/孔）与 Nuclight 绿色试剂标记的 Ramos 细胞（40 /孔）进行共培养。使用 CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE 抗体或葡萄球菌肠毒素 B (SEB) 诱导活化。在 60 h 时，使用 T 细胞活化分析试剂盒、T 细胞介导的细胞杀伤分析试剂盒和 T 细胞耗竭分析试剂盒联合 iQue^® 3 系统分析 10 µL 样本。

每种活化因子会导致不同的 CD3+ T 细胞蛋白表达和杀伤特征：

• CD3/CD28 Dynabead 诱导的 T 细胞活化呈现浓度依赖的特性。最高的微球数量对应于最大的活化标志物表达百分比。该结果与高水平的细胞耗竭标志物呈现相关性。
• 与 Dynabead 和 SEB 相比，CD3×CD19 BiTE 抗体介导的靶细胞死亡增量最多，活化和耗竭水平显著降低。这说明 BiTE 介导的免疫细胞杀伤时间可能持续的较长。
• SEB 刺激，即使在最低浓度下，也可使 T 细胞活化并产生最大杀伤率，导致高水平的 T 细胞耗竭。

图 3.活化机制直接影响 T 细胞的细胞因子释放。

使用来自 T 细胞活化分析试剂盒、T 细胞介导的细胞杀伤分析试剂盒和 T 细胞耗竭分析试剂盒的 Qbeads 测定 Nuclight 绿色标记的 Ramos 和 PBMC（3:1 比例）共培养时细胞因子的释放数据。在多个试剂盒中均检测了 IFNɣ 和 TNFa 的浓度，以便将所有试剂盒的测定结果取平均值。

各个活化因子对细胞因子分泌和对表面蛋白表达的影响相当：

• 在使用的微球数量范围内，CD3/CD28 Dynabead 诱导的细胞因子释放呈浓度依赖性增加。
• 与微球或 SEB 相比，CD3×CD19 BiTE 刺激后的细胞因子释放始终较低（最高刺激浓度下的颗粒酶 B 浓度除外）。该结果表明，在降低毒性风险的情况下（例如细胞因子释放综合征），可以实现高水平的细胞杀伤。
• SEB 可诱导高水平的细胞因子释放（即使在低浓度下）。

* 达到检测上限

图 4.记忆 T 细胞应答受刺激方法的影响。将 PBMC（120 K/孔）和 Ramos 细胞（3:1 E:T 比例）与 3 种不同的活化因子进行共培养。在 60 h 时，使用人 T 细胞记忆分析试剂盒分析 10 µL 样本。

(A) 图中显示了 T 细胞发育为不同的记忆 T 细胞表型时表面标志物表达的改变。从左到右分别为：初始 T 细胞 (T_N)、干细胞样记忆 T 细胞 (T_SCM)、中央记忆型 T 细胞 (T_CM)、移行记忆 T 细胞 (T_TM)、效应记忆 T 细胞 (TEM)、末端效应 T 细胞 (T_TE)、细胞死亡。

(B)、(C) 和 (D) 图展示了在记忆 T 细胞发育的各个阶段表达蛋白的 CD3+ 细胞百分比和 IL-10 的释放数据。图中的蓝色柱代表没有活化因子的对照组。灰色柱代表各个活化因子 3 个依次递增的浓度（由浅至深）：CD3/CD28 Dynabead（30 K、120 K 和 480 K 个微球/孔）；CD3×CD19 BiTE（0.12、1.1 和 10 ng/mL）；SEB（1.2、11 和 100 ng/mL）。

BiTE 抗体诱导的活化结果显示，与 Dynabead 和 SEB 的刺激相比，晚期阶段的记忆 T 细胞（即 T_EM 和 T_TE）比例最低，早期阶段（T_N、T_SCM 和 T_CM）的 T 细胞数量较多。这表明 BiTE 抗体的刺激能够诱导更高水平的细胞杀伤（如图 3 所示），同时也使更高比例记忆 T 细胞能够保持其自我更新的潜能，从而对抗原产生更强的免疫应答。

图 5.T 细胞表征工作流程的分析方案。

使用基于细胞和微球的试剂盒对 T 细胞的活化、杀伤、耗竭和记忆进行组合式分析，以满足用户需求。

图 6.  可在与贴壁细胞系共培养后检测刺激 T 细胞的效果。将 PBMCs（25 K/孔）与贴壁 AU565 细胞（5 K/孔）进行共培养。使用 SEB 诱导 T 细胞活化。在 60 h 时，使用 T 细胞活化分析试剂盒、T 细胞介导的细胞杀伤和 T 细胞耗竭分析试剂盒联合 iQue^® 3 系统提取靶细胞和效应细胞，进行终点分析。

SEB 活化诱导靶细胞杀伤呈浓度依赖性增加，伴随 CD3+ T 细胞上活化（CD69、CD25 和 HLA-DR）和耗竭（PD-1、LAG-3 和 TIM-3）标志物的高表达（在所有使用的 SEB 浓度中均是如此）。