T 细胞耗竭

T 细胞耗竭是一个概念宽泛的术语,用于描述长期刺激造成的 T 细胞功能障碍。耗竭的 T 细胞可表现出独特的表型,包括抑制性标志物(例如 PD-1、LAG-3 和 TIM-3)过度表达,以及 T 细胞释放促炎性细胞因子(IFNγ 和 TNFα)的能力减弱。T 细胞耗竭通常发生在肿瘤微环境中,耗竭的 T 细胞将丧失细胞毒性作用,无法杀伤癌细胞。

如何逆转或克服 T 细胞的耗竭状态问题一直备受关注,特别是通过加入检查点抑制抗体来产生 CAR-T 细胞这一研究。因此,模拟 T 细胞耗竭从问题到解决方案的环境能够帮助我们进一步了解这一现象。


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检测原理

在单个孔中,通过多重方法评估 T 细胞耗竭、增殖和细胞因子释放。

图 1. iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒的分析原理示意图。T 细胞表型分析主要通过检测 3 个耗竭标志物的表达:PD-1(早期)、LAG-3(中期)和 TIM-3(晚期)。还可以使用 2-plex Qbeads,通过夹心法免疫分析,在同一孔中定量分析 2 种效应细胞因子(IFNg 和 TNFα)。您也可以选择同时测定 T 细胞增殖或编码的靶细胞(本示意图中未包含此分析)。

关键优势

同时进行表面蛋白和细胞因子表达的定量测定

图 2.耗竭的 T 细胞将过表达抑制性受体,并产生低浓度的效应细胞因子 TNFα

将未耗竭(即先前未刺激)或耗竭前的 CD3+ T 细胞以 200 K/孔的密度接种。耗竭的 T 细胞在接种前用 Dynabead CD3/CD28(微球:细胞比例 1:1)刺激,然后每隔 2-3 天再次刺激(总共刺激 5 次)。在孔中使用不同密度的 Dynabead CD3/CD28 诱导活化。对照孔中不使用 Dynabead。在 24 h 时,在 iQue® 3 上使用 iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒分析 10 μL 样本。

在生理相关的模型中洞察 T 细胞活化状态的更多生物学信息

图 3. LAG-3 过表达在耗竭 T 细胞上持续 3 天以上

将未耗竭(即先前未刺激)或耗竭前的 CD3+ T 细胞以 200 K/孔的密度接种。耗竭的 T 细胞用 Dynabead CD3/CD28(微球:细胞比例 1:1)进行反复刺激(每隔 2-3 天次刺激一次,总共刺激 5 次)。在孔中使用 Dynabead CD3/CD28 诱导活化。每 24 h 使用 iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒分析 10 μL 样本。

易于使用和解析;可使用预先设门策略

图 4.采用 iQue® ForeCyt® 上的预定义设门进行耗竭 T 细胞亚群的自动表型分析

最大程度减少样本操作:小体积,单次清洗,无需稀释

  • 简单的实验方案,将细胞和上清液作为一个样本,从而简化了工作流程。
  • 无需标记或进行额外的优化步骤。

图 5a. 使用清晰易懂的方案,通过 iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒进行 T 细胞表型和细胞因子释放分析。

图 5b. 清晰易懂的改进方案,分析中允许包含靶细胞。可通过 iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒进行 T 细胞表型和细胞因子释放分析。

订购信息

iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒

平台

兼容 iQue® 3/iQue® Screener Plug - VBR 配置

现有规格

产品目录号立即订购

1 × 96 孔

97069

iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒

5 × 96 孔

97070

1 × 384 孔

97071

5 × 384 孔

97072


技术资源

文献和文档

iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒手册

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贴壁细胞分离方案

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应用指南:使用高通量流式细胞仪进行 CAR-T 细胞耗竭的定量分析

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