通过肿瘤球 T 细胞杀伤检测评估 T 细胞表型和功能

T 细胞在针对受感染细胞或癌细胞的适应性免疫应答的调控和执行方面至关重要。旨在增强 T 细胞肿瘤应答的免疫疗法的开发呈持续增长,例如双特异性抗体、免疫检查点抑制剂和 CAR-T 细胞。这种疗法通过靶向 T 细胞活化和分化途径的不同阶段发挥作用,例如,增强 T 细胞活性或增加记忆细胞的自我更新频率,或者降低 T 细胞耗竭程度。

开发新疗法的关键阶段之一是通过体外检测表征其功能。其中,大部分工作(特别是在流式细胞术领域)都是使用非贴壁细胞或单层细胞 (2D) 完成的。然而,越来越多的证据表明,使用先进的 3D 肿瘤细胞培养物(如肿瘤球和类器官)作为模型能够更好地反映体内情况,从而改善临床转化。

传统 T 细胞应答测定技术通常存在以下弊端:

  • 笼统地检测细胞杀伤情况(如成像),而不深入研究对细胞标志物表达或细胞因子释放的影响
  • 需要通过多个工作流程量化不同的参数,通常需要使用多种不同仪器
  • 缺乏与体内环境的生理相关性
  • 工作流程冗长、耗时;需要诸如方案优化、固定和反复清洗的步骤

在此,我们介绍一种肿瘤球T 细胞杀伤检测工作流程,用户可以使用 iQue® 高通量流式细胞仪和经过验证的配套试剂轻松、可靠地测定 T 细胞应答。用户可以根据自己的需求选择结合使用一种或多种 iQue® 试剂盒(包括 iQue® 人 T 细胞活化分析试剂盒、iQue® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒、iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒 和 iQue® 人 T 细胞记忆分析试剂盒)来生成一系列数据。用户可通过将强大的 iQue® 试剂盒与自动化集成式分析相结合从而完善筛选和分析研究,获得即时药理学数据以洞悉新免疫疗法对 T 细胞应答的影响。


应用

检测原理

图 1a.iQue® 肿瘤球 T 细胞杀伤分析试剂盒的分析原理示意图。

先在 ULA 板中形成肿瘤球,然后再添加免疫细胞(PBMC 或 T 细胞)。可以从单个检测板提取多份 10 µL 上清液样品,进行细胞因子动态定量。在检测终点,分离肿瘤球,获得含有免疫细胞和靶细胞的单细胞悬液。使用 iQue® T 细胞表征检测试剂盒(活化、杀伤、耗竭和记忆)分析细胞和细胞因子。每个试剂盒中包含独特的抗体组合,包括基础 T 细胞标志物,用于分析细胞表面标志物的表达,以及 2-plex iQue® Qbeads®,用于定量分泌的细胞因子浓度,也可在各个孔中同时测定细胞增殖(可选)和活力。

关键优势

  • 支持 3D 肿瘤分析 - 通过可重现、清晰易懂的方案评价 T 细胞对实体瘤的应答,以温和的方式分离肿瘤球

  • 分析表型和功能- 利用先进的 3D 细胞模型在肿瘤细胞杀伤过程中分析 T 细胞表型和功能

  • 提高分析效率 - 快速采样从而增加复制,可实现多试剂盒分析以及高通量定量检测

  • 简化数据采集过程-借助孔板级分析方法和新可视化工具消除瓶颈,更快地获得可操作数据

支持 3D 肿瘤分析

通过可重现、清晰易懂的方案评价 T 细胞对实体瘤的应答,以温和的方式分离肿瘤球


图 1b.  检测工作流程—使用 iQue® 分析 T 细胞的肿瘤球杀伤检测方案。

分析表型和功能

利用先进的 3D 细胞模型在肿瘤细胞杀伤过程中分析 T 细胞表型和功能


图 2a.使用 iQue® 高通量流式细胞仪定量检测肿瘤球 T 细胞杀伤过程中的细胞亚群和细胞因子释放
将使用 Incucyte® Nuclight 标记为绿色的 MDA-MB-231 细胞(2,500/孔)接种到含有 2.5% Matrigel® 的 ULA 板中,孵育 72 小时,促进肿瘤球形成。以 5:1 的效应细胞/靶细胞比 (E:T) 加入未标记的 PBMC,并使用 ImmunoCult™ 人 CD3/CD28/CD2 T 细胞活化因子对其诱导活化。在第 1 天、第 3 天和第 7 天,对接种相同细胞的孔板进行分离,并使用 iQue® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒分析 T 细胞表型。(A) 在 Immunocult 最高浓度下,从第 1 天到第 7 天,靶细胞活力逐渐下降。(B) 从第 1 天到第 3 天,T 细胞活化标志物和 (C) 耗竭标志物表达升高,然后在第 7 天开始下降。(D) 释放的颗粒酶 B(一种直接参与诱导 T 细胞介导肿瘤细胞死亡的蛋白酶)随着 Immunocult 浓度的升高而增加。

图 2b.采集少量上清液样品研究 T 细胞功能随时间的变化和进行细胞因子动态分析
在BT474(2,500/孔)肿瘤球形成 72 小时后,添加 PBMC(12,500/孔)和 CD3/CD28 Dynabead。在第 1 天、第 4 天和第 8 天采集上清液样品 (10 µL),并使用 iQue® Qbeads® 分析细胞因子浓度。提示 T 细胞活化的细胞因子(IFNγ 和 TNFα)的浓度随着时间以及 Dynabead 密度的增加而升高。 此外,颗粒酶 B(直接参与细胞毒性淋巴细胞杀伤靶细胞的蛋白酶)的释放也有所增加。IL-10(一种与记忆 T 细胞形成频率有关的细胞因子)的产生量持续增加至第 4 天,然后在第 8 天开始减少。

提高分析效率

快速采样从而增加复制,可实现多试剂盒分析以及高通量定量检测


图 3.分析用时短,可以使用多个 T 细胞表征检测试剂盒更好地进行广泛的表型分析
在使用 Incucyte® Nuclight 标记为绿色的 BT474(2,500/孔)肿瘤球形成 72 小时后,添加 PBMC(12,500/孔)和 CD3/CD28 Dynabead。在第 1 天、第 4 天和第 8 天,使用 iQue® 人 T 细胞活化、杀伤和耗竭分析试剂盒分析来自复制孔板的细胞。(A) CD3+ 活细胞群中 CD25+ 细胞的孔板视图。(B) 靶细胞活力随着时间的推移而降低。(C) 早期活化标志物 CD69 的表达在第 1 天增加,然后在第 4 天减少。(D) 后期活化标志物 CD25 的表达在第 4 天和第 8 天增加。(E) PD-1(T 细胞耗竭的早期指标)的表达在第 4 天最高。

简化数据采集过程

快速采样从而增加复制,可实现多试剂盒分析以及高通量定量检测


图 4.使用iQue® Forecyt® 中预先设定的设门模板,实现 T 细胞亚群自动分型将 BT474 肿瘤球(2,500/孔)与 PBMC(效应细胞/靶细胞比 (E:T) 为 5:1)共孵育,然后使用 CD3/CD28 Dynabead 诱导活化。在第 24 小时,使用 iQue® 人 T 细胞记忆分析试剂盒进行分析。(A) 使用试剂盒中的模板对 Tscm(干细胞记忆 T 细胞)和 Tte(末端效应 T 细胞)设门的图。在直接从 iQue® Forecyt® 软件导出的 (B) 热图和 (C) 浓度响应曲线中,明显可以看出随着 Dynabead 浓度的增加从早期 Tscm(干细胞记忆 T 细胞)表型到后期 Tte(末端效应 T 细胞)表型的变化。这种变化还伴随着 T 细胞自我更新能力丧失。

订购信息

iQue® 人 T 细胞活化分析试剂盒
平台:兼容 iQue® 3/iQue® Screener Plus - VBR 配置
现有规格产品目录号

1 x 96 孔

90560

5 x 96 孔

90561

1 x 384 孔

90562

5 x 384 孔

90563

iQue® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒
平台:兼容 iQue® 3/iQue® Screener Plus - VBR 配置
现有规格产品目录号

1 x 96 孔

97060

5 x 96 孔

97061

1 x 384 孔

97062

5 x 384 孔

97063

iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒
平台:兼容 iQue® 3/iQue® Screener Plus - VBR 配置
现有规格产品目录号

1 x 96 孔

97069

5 x 96 孔

97070

1 x 384 孔

97071

5 x 384 孔

97072

iQue® 人 T 细胞记忆分析试剂盒
平台:兼容 iQue® 3/iQue® Screener Plus - VBR 配置
现有规格产品目录号

1 x 96 孔

97035

5 x 96 孔

97036

1 x 384 孔

97037

5 x 384 孔

97038

可通过可选的 QPanel T 辅助细胞分析试剂盒进行更多表征,请参阅各个应用页面了解详细信息。

申请试用

资源

技术资源

方案

单球内的 T 细胞杀伤

立即下载

产品指南

iQue® 人 T 细胞活化分析试剂盒

立即下载

产品指南

iQue® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒

立即下载

产品指南

iQue® 人 T 细胞耗竭分析试剂盒

立即下载

产品指南

iQue® 人 T 细胞记忆分析试剂盒

立即下载

肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)

了解更多

采用活细胞分析和流式细胞术联合分析免疫细胞...

了解更多

联系我们

联系我们