通过肿瘤球 T 细胞杀伤检测评估 T 细胞表型和功能

通过可重现、清晰易懂的方案评价 T 细胞对实体瘤的应答，以温和的方式分离肿瘤球

图 1b.  检测工作流程—使用 iQue^® 分析 T 细胞的肿瘤球杀伤检测方案。

利用先进的 3D 细胞模型在肿瘤细胞杀伤过程中分析 T 细胞表型和功能

图 2a.使用 iQue^® 高通量流式细胞仪定量检测肿瘤球 T 细胞杀伤过程中的细胞亚群和细胞因子释放
将使用 Incucyte^® Nuclight 标记为绿色的 MDA-MB-231 细胞（2,500/孔）接种到含有 2.5% Matrigel^® 的 ULA 板中，孵育 72 小时，促进肿瘤球形成。以 5:1 的效应细胞/靶细胞比 (E:T) 加入未标记的 PBMC，并使用 ImmunoCult™ 人 CD3/CD28/CD2 T 细胞活化因子对其诱导活化。在第 1 天、第 3 天和第 7 天，对接种相同细胞的孔板进行分离，并使用 iQue^® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒分析 T 细胞表型。(A) 在 Immunocult 最高浓度下，从第 1 天到第 7 天，靶细胞活力逐渐下降。(B) 从第 1 天到第 3 天，T 细胞活化标志物和 (C) 耗竭标志物表达升高，然后在第 7 天开始下降。(D) 释放的颗粒酶 B（一种直接参与诱导 T 细胞介导肿瘤细胞死亡的蛋白酶）随着 Immunocult 浓度的升高而增加。

图 2b.采集少量上清液样品研究 T 细胞功能随时间的变化和进行细胞因子动态分析
在BT474（2,500/孔）肿瘤球形成 72 小时后，添加 PBMC（12,500/孔）和 CD3/CD28 Dynabead。在第 1 天、第 4 天和第 8 天采集上清液样品 (10 µL)，并使用 iQue^® Qbeads^® 分析细胞因子浓度。提示 T 细胞活化的细胞因子（IFNγ 和 TNFα）的浓度随着时间以及 Dynabead 密度的增加而升高。 此外，颗粒酶 B（直接参与细胞毒性淋巴细胞杀伤靶细胞的蛋白酶）的释放也有所增加。IL-10（一种与记忆 T 细胞形成频率有关的细胞因子）的产生量持续增加至第 4 天，然后在第 8 天开始减少。

快速采样从而增加复制，可实现多试剂盒分析以及高通量定量检测

图 3.分析用时短，可以使用多个 T 细胞表征检测试剂盒更好地进行广泛的表型分析
在使用 Incucyte^® Nuclight 标记为绿色的 BT474（2,500/孔）肿瘤球形成 72 小时后，添加 PBMC（12,500/孔）和 CD3/CD28 Dynabead。在第 1 天、第 4 天和第 8 天，使用 iQue^® 人 T 细胞活化、杀伤和耗竭分析试剂盒分析来自复制孔板的细胞。(A) CD3+ 活细胞群中 CD25+ 细胞的孔板视图。(B) 靶细胞活力随着时间的推移而降低。(C) 早期活化标志物 CD69 的表达在第 1 天增加，然后在第 4 天减少。(D) 后期活化标志物 CD25 的表达在第 4 天和第 8 天增加。(E) PD-1（T 细胞耗竭的早期指标）的表达在第 4 天最高。

快速采样从而增加复制，可实现多试剂盒分析以及高通量定量检测

图 4.使用iQue^® Forecyt^® 中预先设定的设门模板，实现 T 细胞亚群自动分型将 BT474 肿瘤球（2,500/孔）与 PBMC（效应细胞/靶细胞比 (E:T) 为 5:1）共孵育，然后使用 CD3/CD28 Dynabead 诱导活化。在第 24 小时，使用 iQue^® 人 T 细胞记忆分析试剂盒进行分析。(A) 使用试剂盒中的模板对 Tscm（干细胞记忆 T 细胞）和 Tte（末端效应 T 细胞）设门的图。在直接从 iQue^® Forecyt^® 软件导出的 (B) 热图和 (C) 浓度响应曲线中，明显可以看出随着 Dynabead 浓度的增加从早期 Tscm（干细胞记忆 T 细胞）表型到后期 Tte（末端效应 T 细胞）表型的变化。这种变化还伴随着 T 细胞自我更新能力丧失。