用于免疫细胞功能的记忆 T 细胞
在初次感染期间,获得性免疫系统通过识别相应的效应 T 细胞来做出应答,细胞扩增并转化出多种功能,以应对特定的免疫挑战。感染清除后,大部分适应性 T 细胞执行程序性死亡(凋亡),而一系列异质性的记忆 T 细胞则会保留下来。这些细胞为抗原特异性 T 细胞,会在感染被清除后长期保留。记忆 T 细胞再次暴露于相同的抗原时,会快速分化为大量的效应细胞,对此前出现过的感染做出快速应答。
疫苗和过继性细胞转化免疫治疗方案都会受记忆 T 细胞异质性的影响,能够使用单个方法鉴别这些功能不同的记忆 T 细胞亚群对于免疫治疗具有重要意义。T 细胞记忆表型和细胞因子释放的传统检测方法通常:
- 需要分开进行细胞因子(例如 ELISA)和标志物表达分析(例如传统流式细胞术)
- 使用低通量采集和需要大样本量的仪器
- 需要人工分析并从多个来源汇总数据
- 工作流程冗长、耗时;需要诸如方案优化、固定和反复清洗的步骤
iQue® 人 T 细胞记忆分析应用,采用 iQue® 人 T 细胞记忆分析试剂盒进行同时、高通量的 T 细胞记忆表型以及分泌的效应蛋白和细胞因子分析,结合 iQue® 高通量流式细胞仪的强大功能和集成式 iQue® ForeCyt® 软件的实时数据分析,可为您提供简化的记忆 T 细胞集群定量解决方案,可应用于肿瘤免疫学疗法的开发和研究。
检测原理
关键优势
- 洞察生物学结果 - 通过生理相关的模型研究 T 细胞记忆表型
- 提高分析效率 - 在细胞和微球混合分析中同时测定细胞标志物和分泌的细胞因子
- 简化数据分析 - 实时数据分析和创新的可视化工具,支持快速生成定量读数
- 节省时间和宝贵的样本 - 将传统工作流程压缩为单个小型化的多重分析
洞察生物学结果
图 2.细胞因子的刺激可以使具有高度自我更新能力的记忆细胞维持 5 天以上。
将 PBMCs(100 K/孔)接种,进行单一培养,加入“核心”细胞因子(IL-4,100 ng/mL 和 IL-7,10 ng/mL)和 Dynabead CD3/CD28(25 K/孔)。使用各种组合的细胞因子(L-15,10 ng/mL;IL-6、IL-21 和 IFNß,100 ng/mL)处理细胞,并在第 2 天和第 5 天取样 10 µL,采用 iQue® 人 T 细胞记忆分析试剂盒进行分析。
使用 IFNß(斜纹条柱)可使 IL-10 的分泌增加,同时也将 CD8+ 中央记忆型 T 细胞的比例提高到 3 倍,而 IFNß 与白介素(例如 IL-6)联用没有增加 IL-10 的分泌或 TCM 的数量。
图中展示的数据来自大型 panel 分析,该分析设计用于优化过继细胞疗法生物制造的培养条件。热图显示了所有测试的处理中的 TCM 细胞。蓝色框标出的是经 IFNß 处理,且与其他处理类型相比具有更高 TCM 细胞比例的孔。
图 3. 诱导 T 细胞的 CAR 表达时,具有高度自我更新能力的记忆细胞并不是总能保留。
HER-2 和 CD19 CAR-T 细胞经冻融处理。使用 Dynabead CD3/CD28 将来自相同供体的对照 T 细胞活化 3 天。用 T 细胞记忆抗体 panel 标记细胞(100 K/孔,5 个重复)以评估表型。(A) 图中显示了 T 细胞发育为不同的记忆 T 细胞表型时表面标志物表达的改变。从左到右分别为:初始 T 细胞 (TN)、干细胞样记忆 T 细胞 (TSCM)、中央记忆型 T 细胞 (TCM)、移行记忆 T 细胞 (TTM)、效应记忆 T 细胞 (TEM)、末端效应 T 细胞 (TTE)、细胞死亡。(B) 活化的 T 细胞,(C) HER-2 CAR-T 记忆细胞表型,(D) CD19 CAR-T 记忆细胞表型。
提高分析效率
图 4.不同供体的记忆 T 细胞发育变化。
将来自 3 个单独供体的 PBMCs(120 K/孔)与 Ramos 细胞共培养(3:1 E:T 比例),并用数量递增的 Dynabead CD3/CD28 进行活化。在 72 h 时,使用 iQue® 人 T 细胞记忆分析试剂盒分析 10 µL 样本。
(A) 供体 1,(B) 供体 2,(C) 供体 3,三张图表中展示了在记忆 T 细胞发育的各个阶段表达蛋白的 CD3+ 细胞百分比和 IL-10 的释放数据。图中的蓝色柱代表没有活化因子的对照组。灰色柱代表 3 个依次递增的 Dynabead 浓度(由浅至深):60 K、120 K 和 480 K 微珠/孔。
简化数据分析
图 5.利用 iQue® ForeCyt® 上的预先设门功能进行 T 细胞亚群的自动表型分析
使用各种密度的 Dynabead CD3/CD28 对来自 3 个不同供体的 PBMC(120 K/孔)进行活化。在第 3 天,使用 iQue® 人 T 细胞记忆分析试剂盒进行分析。(A) 图中展示了用于区分记忆 T 细胞集群的中央记忆型 T 细胞 (TCM)、移行记忆 T 细胞 (TTM),以及效应记忆 T 细胞 (TEM) 的设门策略。(B) 热图中展示了来自每个供体的表达 TEM 表型的 T 细胞比例。在较低的 Dynabead 密度下,供体 2 形成 TEM 表型的敏感性要强于供体 1 和供体 3。(C) 图中将来自 (B) 图的数据汇总为浓度响应曲线。
订购信息
人 T 细胞记忆分析试剂盒 | ||
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平台:兼容 iQue® 3/iQue® Screener PLUS - VBR 配置 | ||
现有规格 | 产品目录号 | |
1 × 96 孔 | 97035 | |
5 × 96 孔 | 97036 | |
1 × 384 孔 | 97037 | |
5 × 384 孔 | 97038 |