活细胞免疫细胞化学

Incucyte^® 活细胞免疫细胞化学分析方案将自动化成像分析的强大功能与简单易用的抗体标记方法相结合，可在组织培养箱内进行基于图像的表面蛋白表达动力学测定。

活细胞免疫细胞化学分析为长期跟踪和定量细胞表面蛋白标记物提供了强大的解决方案，且随后还可以将标记物与细胞功能和形态相关联，从而更深入地洞察细胞过程。

图 1. Incucyte^® Fabfluor-488 染料荧光的自动分析结果显示，PD-L1 的表达随细胞类型、时间和浓度的增加而增加（右图）。在含有 Incucyte^® Fabfluor-488-α-PD-L1 抗体复合物和 Incucyte^® Opti-Green 背景抑制剂的情况下，将带有 Incucyte^® Nuclight 红色标记 MDA-MB-231（乳腺）或 SKOV-3（卵巢）癌细胞与 IFNγ 共培养。绿色荧光区域的定量结果表明，在 IFNγ 的诱导下，MDA-MB-231 细胞中 PD-L1 的表达呈时间和浓度依赖性增加。时程曲线显示了 MDA-MB-231（高表达）和 SKOV-3（中表达）细胞中 PD-L1 的表达差异。

图 2. 将细胞表面标志物、吞噬细胞活力和增殖检测的多重分析和形态学观察应用于分化研究（右图）。在 CD11b、CD14 或 CD40 复合 Incucyte^® Fabfluor-488 抗体存在的情况下，将 THP-1 单核细胞暴露于培养基（未分化）、维生素 D3 或 PMA 中。与培养基单独处理或维生素 D3 处理的细胞相比，PMA 处理后细胞形态显示出明显的变化（高清相差图片）。动态图突出显示了不同处理条件下，细胞表面蛋白表达的差异性和时间依赖性。有趣的是，在检测 Incucyte^® pHrodo^® 红色细胞标记试剂盒标记的 Jurkat 凋亡细胞的胞葬作用时，PMA 会导致细胞增殖（汇合）减少，同时吞噬能力增加，而培养基或维生素 D3 处理则未出现这种结果。

（视频）在免疫细胞杀伤模型中，确认细胞间相互作用随时间的变化。在含有 Incucyte^® Fabfluor-488 标记的 CD8 抗体的情况下，将带有 Incucyte^® Nuclight 红色标记的 A549 肺癌细胞与人 PBMCs 共培养。CD3/IL-2 对 PBMC 的活化提高了 PBMCs 与肿瘤细胞的相互作用。免疫细胞的 Incucyte^® Fabfluor-488-CD8 标记证实了细胞极性，其中 PBMC的 CD8+ 区域看上去与 A549 肿瘤细胞有所接触。

图 5. Incucyte^® Fabfluor-488 染料显示出表面标志物表达随时间变化的特异性和持久性。Ramos（B 细胞样）细胞在多种 Incucyte^® Fabfluor-488 标记抗体和 Incucyte^® Opti-Green 存在的环境下生长。从图中可以观察到非特异性 (CD45) 和特异性 (CD20) B 细胞标记物的长期标记。T 细胞标记 (CD3) 或同型对照抗体则未观察到荧光信号。 当 Ramos 和 Jurkat（T 细胞样）细胞以固定比例混合时，可检测到预期水平的 CD20 染色，证明了 CD20 在混合培养中的作用。