概述
中性粒细胞胞外诱捕网的实时定量分析
中性粒细胞处于感染部位的第一道防线，在先天免疫系统中发挥着重要作用，中性粒细胞可采用多种策略来降解和杀死微生物，其中包括释放中性粒细胞胞外诱捕网 (NET)。NET 是一种由抗微生物蛋白和 DNA 组成的网状结构，通过一种独特的中性粒细胞程序性死亡形式释放，该过程称为 NETosis。NET 是一种宿主防御的策略，捕获然后降解病原体，但 NET 也与多种自身免疫性疾病（包括类风湿性关节炎）和病理状态相关。
我们的策略
使用 Incucyte® 活细胞成像系统和 Incucyte® Cytotox 绿色试剂实时自动定量分析执行 NETosis 过程的中性粒细胞。使用 Incucyte® 活细胞试剂分析观察和评估 NETosis 过程中细胞核的膨胀和解聚阶段，以及之后的 NET 释放过程。
NETosis 分析
Incucyte® NETosis 分析简介
Incucyte® NETosis 分析可提供一种综合性解决方案，可在组织培养箱内实时自动观察和定量分析 NETosis，支持 96 孔规格。
使用 Incucyte® 活细胞 NETosis 分析方案进行 NETosis 分析。实时监测使用 PMA 处理的人源中性粒细胞的 NETosis 过程（左边视频）。将进行 NETosis 的中性粒细胞用即混即读的 Incucyte® Cytotox 绿色试剂标记为绿色，并使用 Incucyte® 活细胞分析系统进行实时定量分析。
关键优势
- 使用延时成像技术验证 NETosis - Incucyte® 活细胞分析系统可验证与 NETosis 相关的独特形态变化，实时跟踪多叶细胞核的丢失、核解聚和细胞膜破坏。
- 使用 Incucyte® Cytotox 绿色试剂在整个分析过程中进行自动化分析 - 确定处理效果如何以及何时发生作用，无需将细胞从培养箱的稳定环境中取出，非常适合用于敏感细胞的分析。
- 简单的即混即读 96 孔方案，适用于药理学筛选; 无需细胞清洗、固定和分离操作 - 采用即混即读的 Incucyte® Cytotox 绿色试剂，在细胞外 DNA 释放和荧光增强时快速可视化并定量分析 NETosis。
- 联合细胞凋亡的多重分析深入洞察机制 -将 Incucyte® Annexin V 红色染料和 Cytotox 绿色试剂相结合进行多重测定，可轻松区分细胞凋亡和 NETosis
使用延时成像技术验证 NETosis
Incucyte® 活细胞分析系统可验证与 NETosis 相关的独特形态变化，实时跟踪多叶细胞核的丢失、核解聚和细胞膜破坏。
使用 Incucyte® 高清图像验证 NETosis。 在 Incucyte® Cytotox 绿色试剂存在的情况下，使用 PMA 刺激 DMSO (1.25% v/v) 和 ATRA (0.1 µM) 诱导分化的 HL-60 细胞获得 Incucyte® 图像。注意刺激后 2 小时左右会出现细胞核特征性解聚。随着细胞质与核质的混合，细胞核在相位图像中不再可见。细胞核内容物转移到质膜上并释放出来，外部 DNA 与 Incucyte® Cytotox 绿色试剂结合，可观察到荧光增强（绿色）。
使用 Incucyte® Cytotox 绿色试剂在整个时间进程中进行自动分析
确定处理效果如何以及何时发生作用，无需将细胞从培养箱的稳定环境中取出，非常适合用于敏感细胞的分析。
自动、非侵入性地定量处理效果。Incucyte® NETosis 分析可对 96 孔板的每个孔进行自动成像和分析，提供中性粒细胞随时间变化的生理动力学读数（左图）。使用带有面积过滤器的集成式 Incucyte® 基础分析仪软件（右图，排除小于 300 µm2 的对象）能够区分细胞凋亡（经 CMP 处理的较小标记细胞，只有细胞核因失活而发出荧光）和 NETosis（经 PMA 处理，核内容物转移到质膜上并释放出来，外部 DNA 被标记）的诱导处理。
简单的即混即读 96 孔板方案，适用于药理学筛选；无需细胞清洗、固定和分离操作
采用即混即读的 Incucyte® Cytotox 绿色试剂，在细胞外 DNA 释放和荧光增强时快速可视化并定量分析 NETosis。
使用 Incucyte® Cytotox 绿色试剂在整个时间进程中进行自动分析
揭示浓度依赖性响应并进行药理分析。使用浓度递增的 NADPH 氧化酶抑制剂二苯基氯化碘盐 (DPI) 处理 dHL-60 细胞， 然后用 PMA 刺激细胞，并采用简单的即混即读方案，通过 Incucyte® Cytotox 绿色试剂标记细胞。时程图显示在 100 nM 浓度 PMA 的刺激下，绿色对象的总面积随时间的推移而增加，并随着 DPI (A) 浓度的增加而受到抑制；Incucyte® 采集的孔板视图显示出清晰的阳性和阴性对照反应（H 行），每种抑制剂的处理均表现出浓度依赖性反应（每种抑制剂，每种浓度 n = 3）(B)；曲线下面积分析可以清晰地显示出浓度依赖性反应 (C)。
联合细胞凋亡的多重分析深入洞察机制
将 Incucyte® Annexin V 红色染料和 Incucyte® Cytotox 绿色试剂相结合进行多重测定，可轻松区分细胞凋亡和 NETosis
结合磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻的 NETosis 多重测定。使用 Incucyte® Cytotox 绿色试剂（NETosis - 高荧光，对象区域大）或 Incucyte® Annexin V 红色染料（PS 外翻 - 低荧光）标记经 PMA 或离子霉素刺激的细胞，检测不同类型的中性粒细胞死亡。
订购信息
Incucyte® Cytotox 绿色试剂和 Annexin V 红色染料经过充分验证，可用于 Incucyte® 活细胞分析系统，并可在同一孔内与 NETosis 和细胞凋亡的联合进行多重检测。
产品 | 数量 | 产品目录号 |
|---|---|---|
| 用于死亡细胞计数的 Incucyte® Cytotox 绿色试剂 | 5 uL x 5 | 4633 |
| 用于细胞凋亡的 Incucyte® Annexin V 红色染料 | 100 次检测 | 4641 |
技术资源
文献和文档
相关应用
使用高通量实时成像技术定量 NETosis 以及区分人中性粒细胞的细胞死亡机制。
使用高通量实时成像技术定量 NETosis 以及区分人中性粒细胞的细胞死亡机制。 Gupta S, Chan DW, Zaal KJ, Kaplan MJ. J Immunol, 200: 869-879, 2017
“Incucyte® 是创新的实时分析平台，能够以快速、自动化和可重现的方式定量分析 NETosis，大幅优化了中性粒细胞的研究。该平台是评估中性粒细胞生理学和 NETosis，以及快速开发和测试新型中性粒细胞靶标的强大工具。”