Incucyte® 线粒体膜电位分析
线粒体膜电位（MMP 或 ΔΨm）是在电子传递链合成 ATP 时，维持合成所需氢离子电化学势的基本组成部分，并已证明是维持线粒体健康的重要因素。在正常生理活动下，MMP 保持相对稳定。然而，长期的干扰会对细胞健康和活力产生不利影响，导致各种病理生理问题。MMP 的监测可提供早期线粒体完整性的灵敏指标，对于识别与糖尿病、癌症和神经退行性疾病等病理性疾病相关的线粒体功能障碍非常关键。
评估 MMP 的常用分析通常依赖于间接的串联终点测定，难以通过形态变化进行验证。Incucyte® 线粒体膜电位分析方案能够实时检测活细胞中 MMP 的瞬时和长期变化，并可以与细胞标记、细胞凋亡或细胞毒性试剂联合使用，进一步评估细胞健康。持续追踪 MMP 变化，揭示细胞稳态和疾病的复杂性。
应用
Incucyte® 线粒体膜电位分析可提供一种综合性解决方案，支持在细胞培养箱内实时自动观察和定量分析 MMP 变化。 与 TMRE 和 TMRM 分析类似，Incucyte® MMP 橙色试剂可渗透细胞，并在活性线粒体中累积，与线粒体膜电化学梯度产生的 ΔΨm 成比例。 MMP 下降表示线粒体的功能和/或完整性受到干扰，也可将其用作细胞凋亡的早期指标。
该分析试剂盒使用两种对照化合物：FCCP，一种解偶联剂，可转运 H+ 离子穿过线粒体膜并使线粒体膜去极化（表现为荧光减少）；寡霉素 A，一种 ATP 合酶抑制剂，可导致膜超极化（表现为荧光增加）。
关键优势
- 评估线粒体压力 -使用便捷的即混即读方案对线粒体压力进行动力学测定
- 检测活细胞中 MMP 的变化 - 自动生成定量且可重现的活细胞中 MMP 的测定数据 - 全部分析在细胞培养箱内完成
- 监测细胞形态变化并结合细胞健康试剂进行多重分析 - 可观察细胞形态随时间的变化，结合细胞凋亡或细胞毒性读数，评估与代谢变化相关的细胞健康变化
评估线粒体压力
利用 Incucyte® MMP 橙色试剂盒，通过便捷的即混即读方案快速可视化和定量分析 MMP 的变化。
检测活细胞中 MMP 的变化
自动生成定量且可重现的活细胞中 MMP 的测定数据。通过检测荧光强度随时间的变化定量分析 MMP 变化。
图 1. 线粒体膜电位的动力学监测。在 Incucyte® MMP 橙色染料存在的情况下，使用溶媒、喜树碱、FCCP 或寡霉素处理 HeLa 细胞，然后监测（随时间变化）化合物对线粒体膜电位的影响 (A)。 对照孔和药物处理孔的平均荧光强度线性图突出显示了化合物诱导 0 小时和 40 小时的线粒体极化变化 (B)。使用 Incucyte® Cell-by-Cell 分析软件进行无标记细胞计数 (C)。溶媒、FCCP、寡霉素（6 小时）、喜树碱处理（40 小时）获得的高清相位/荧光图像 (D)。
监测细胞形态变化并结合细胞健康试剂进行多重分析
Incucyte® MMP 橙色试剂盒可与 Incucyte® Caspase 3/7、Annexin V 或 Cytotox 染料联合用于定量细胞凋亡或细胞毒性，以及观察细胞形态随时间的变化。
图 2. 结合细胞健康读数的多重线粒体膜电位测定。在 Incucyte® MMP 橙色试剂和 Cytotox NIR 染料存在的情况下，使用蛋白激酶抑制剂十字孢碱 (SSP) 处理 HeLa 细胞，然后联合评估化合物的细胞毒性及其对线粒体膜电位的影响 (A)。(B) 图中显示了 MMP 和 Cytotox NIR 检测的浓度相应曲线（24 小时数据）。(C) 图中显示了对照孔、0.3 µM SSP 处理孔和 3 µM SSP 处理孔的代表性高清相位 + 荧光图像（在 24 小时的时间点）。
