实验过程:细胞生物学和蛋白质纯化

在执行所设计的实验当天,需要使用所有工具来可靠操作。无论您是在执行时间过程实验、分析蛋白质表达,还是在细胞培养中进行任何其它实验,所有工具都必须完美配合,以输出可信赖的数据。

为了帮助您将想法转化为真知灼见,我们提供了一系列细胞培养工具和技术,以助您完成实验和获取可信赖的数据。

阅读以下主题,获取更多信息:

浓缩与透析

如果您培养细胞的目的是纯化蛋白质,那么您一天的大部分时间都花费在过滤、提纯和浓缩蛋白质上。长时间纯化实验期间,蛋白质可能在任何一步骤发生降解、沉淀或损失,因此,这些步骤将成为一大挑战。选择正确的工具可以提高效率,减少纯蛋白和浓缩蛋白损失的几率。

实验中的每一步都可能减少您的蛋白产量:

  • 细胞裂解期间的蛋白降解。细胞裂解和澄清上清液可能需要数小时,蛋白接触蛋白酶可能会被截短或完全降解。
  • 浓缩期间变干。成功完成纯化步骤后,浓缩似乎变得琐碎又无足轻重。但在未采取必要预防措施情况下,过快地旋转样品或旋转时间过长,就可能在蛋白浓缩器中丢失蛋白。
  • 透析期间的泄露。在长时间、多个步骤的透析期间,蛋白可能从透析袋或透析盒中泄露。特别是在持续多日的实验期间,即使盒子完好,蛋白也可能会展开、重新折叠、聚合或发生水解。在最后一个阶段失去蛋白特别令人沮丧。

保持蛋白质完整和加快净化的工具:

Vivaspin超滤浓缩器

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Minisart针头滤器

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处理分泌蛋白

使用分泌蛋白质可以避免混乱的溶解过程。此外,在纯化过程中,蛋白质不会遇到细胞内蛋白酶。无论蛋白质是自然分泌,还是您优化了细胞内的蛋白质,从而在HEK Freestyle或其它优化的细胞系中进行纯化,您都会面临一系列不同的挑战。例如,必须从量相对较大的上清液中分离出完整的细胞,并且必须浓缩蛋白样品。

分离、透析和浓缩分泌蛋白的工具:

Vivaflow切向流超滤浓缩装置

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Sartoclear Dynamics实验室细胞培养澄清系统

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快速获取有关细胞的真知灼见

如果细胞培养工作流程的目的是提供细胞生理上的相关信息,则需要正确的工具来对细胞进行成像和分析。最好的工具可提供可复制和信息丰富的分析,以帮助您快速洞悉结果并采用具有成本效益的方式公布结果。

细胞增殖

增殖是正常组织发育、再生和更新的基本机制。三种主要的生化细胞增殖试验是基于DNA合成、代谢活动和ATP浓度,通常是结合在一起的单终点试验,以提供时间过程数据。这些终点测量属于间接方法,并且容易受到无法通过形态变化轻易验证的伪影的影响。

通过活体细胞成像,在培养箱内连续进行细胞增殖试验,如:无标签融合测量和使用荧光标记的直接细胞计数。

细胞凋亡

细胞凋亡是正常组织发育和内稳态的一个重要过程,在这个过程中细胞会及时发生程序性死亡。常用的细胞凋亡检测方法包括使用酶标仪或流式细胞仪检测caspase-37激活或PS外化的酶检测方法。这些常见的检测方法可得出单一的、用户定义的终点测量结果,需要多个清洗步骤或细胞提升从而可能导致伪影,并且这些方法不适合长期测量,因为背景信号会随着时间的推移而增强。

活细胞分析允许使用专用试剂同步、实时测量多种凋亡通路。然后,凋亡信号可以与相衬图像相关联,提供凋亡细胞死亡相关的其他生物学见解和形态学验证。

细胞毒效应

细胞毒性是一个笼统的术语,描述了物质或环境变化对细胞健康的有害影响,这些影响可能危及代谢活动、抑制细胞生长或分裂,或最终导致细胞死亡。

许多细胞毒性试验涉及到细胞膜完整性的测定,即使用无法渗透至健康细胞的染料,或者通过释放死亡细胞标记物的方式。此外,代谢活动测量也被用来测定细胞毒性。然而,这些试验很少涉及随着时间的推移直接对死亡细胞的计数。

活细胞分析允许使用专用试剂实时测定基于细胞膜完整性的凋亡通路。死亡细胞的细胞核吸收一种被活细胞排除在外的惰性染料,荧光信号随着时间的推移而增强,从而识别出死亡细胞。然后,细胞毒性信号可以与相衬图像相关联,提供凋亡细胞死亡相关的其他形态学验证。

Incucyte 活细胞分析系统

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