细胞制备：细胞传代和培养污染
细胞培养准备包括：确保对实验结果有信心所必备的基本技术。在所有这些技术中，最基本的是用于传代细胞以及制备培养基和试剂的无菌技术。但还需要有效的方法来冷冻和解冻细胞系。
细胞培养的质量将直接转化为实验的可重复性。为了获得可以信任的生物学见解，我们提供细胞培养工具，为获得可靠实验数据奠定基础。
阅读以下主题，获取更多信息：
控制污染，以免您的实验因此而终止
细胞培养的主要挑战之一是污染，它以细菌、酵母、霉菌、化学物质、其它生物制剂、细胞系交叉污染或以上几种形式的组合出现。污染可能会影响您所培养细胞的生长、形态和行为，并最终影响实验结果。
细菌污染
最常见的污染就是细菌。通常自来水的细菌污染物含量达100-1000 CFU/100 mL，但美国材料与试验协会（ASTM International）设定的标准为细胞培养时，细菌污染物含量必须小于10 CFU/100 mL。与其它污染物不同的是，细菌污染通常很容易检测到，因为培养物会变得混浊，并且/或者培养基的颜色会发生变化，导致pH值下降。细菌在显微镜下也很容易看见。
虽然细菌污染通常很容易检测到，但它仍然会妨碍你，因为你可能无法立刻注意到它。另外，去污不仅成本高昂，而且很耗时。
为了避免受到细菌污染：
- 勤于采用无菌技术，且仅使用无菌试剂
- 留意一般实验室库存，污染监测往往是其中的一大挑战
- 务必留心您的试剂，利用无菌过滤以消除任何污染的可能性
- 水也是一种重要的试剂，因此务必要使用新鲜制作的超纯水作为你的库存和用于培养基
有助于避免细菌污染的工具：
支原体污染
支原体污染比较难对付。这些小的（0.15m-0.3m）细菌没有细胞壁，有一层柔软的细胞膜。这使得支原体很难通过显微镜检测到，并且由于支原体尺寸较小，即使哺乳动物细胞培养物增殖到较高浓度，细胞培养物表面也看不到任何明显浑浊迹象或其它变化。
直到细胞消失，培养物污染才可能没那么明显。
其它受污染细胞的交叉污染是支原体污染的主要来源之一。消除培养物中的支原体污染几乎不可能；它对大多数抗生素有抵抗力，可以在未经冻存技术处理的液氮中存活，污染储存在同一液氮容器中的其它细胞。
最好的方法是要防止细胞系出现全面的支原体污染：
- 定期测试培养物，如有任何支原体培养物呈阳性则丢弃
- 任何外来的新培养物都需隔离和测试
购买或自己制作培养基
您所选的细胞培养基是实验设计中最重要的方面之一。您的选择应取决于要培养的细胞类型和培养的实验目的。不同的细胞系和细胞类型具有高度特异性的生长要求，并且有许多培养基配方可以满足您所选细胞的生长要求。您可以购买现成的培养基（液体或粉末形式皆可）或在实验室自行制备。无论哪种情况下，水都是细胞培养基、缓冲液和添加剂的主要成分，而水质在任何细胞培养实验中都起着至关重要的作用。
应使用不含污染物的优质纯水，以确保细胞是健康的，并且各实验都应采用相同的方式来执行。
化学物质或其它生物制剂造成的污染，如内毒素、无机离子和有机化合物，肉眼无法辨别，可能会影响细胞的生长、形态和行为。通常自来水含有1-10IU/mL的内毒素污染物，但国际标准<链接>规定：细胞培养中内毒素污染物应小于0.1IU/mL。这意味着水净化系统需要从用于细胞培养的水中清除这种内毒素。使用正确的水过滤系统，有助于培养健康的细胞，确保细胞培养实验具有一致性和可重复性。
应用手册
Water is Life: Ultrapure Water in Cell Cultivation
Water is a major component of all cell culture media and is therefore needed to prepare media, buffers, and additives, and as well as to serve many ancillary functions, such as heating, cooling, cleaning and rinsing. Learn how ultrapure water improves the outcome of your cell culture experiments in this application note.
应用手册
Preventing Cell Death: Ultrapure Water System Lowers Endotoxin Content Below Prescribed Limits
The presence of endotoxins can lead to cell death in mammalian cell cultures. For this reason, ultrapure media, i.e., ultrapure water, with levels proven to be below the limits must be used to manufacture biopharmaceuticals or to propagate cell lines or cell cultures. Read our application note to learn how the Arium® pro VF ultrapure water system provides the highest quality, on-demand water that exceeds your requirements for endotoxin-free water.
可使培养基和缓冲液制备可靠且无污染的工具：
细胞传代
无论您使用的是贴壁细胞还是非贴壁细胞，细胞培养都需要定期传代或再培养。然而传代会带来污染风险，因为需要打开培养瓶对细胞进行操作，并增加新培养基和成分。所有这些步骤都有可能引入污染物。采用适当的无菌技术、快速操作并使用最佳工具和未污染试剂有助于降低在细胞培养中引入污染物的风险。尤其是要采用正确的无菌移液技术，使用无菌过滤移液器和移液器吸头，以便能够快速有效地工作，这一点至关重要。
简化无菌技术的工具：
冷冻、解冻细胞，尽可能减少损坏
成熟细胞系是您的宝贵资源，但遗憾的是，它们也很脆弱。持续培养的细胞系可能因细胞群的衰老、污染和遗传漂移而有所损失。因此，成熟细胞系要储存在液氮中进行低温保存。然而，冷冻和解冻的工艺流程会给这些脆弱的细胞带来压力。储存于液氮中的细胞往往通过使用冷冻保护剂，如二甲亚砜（DMSO）或甘油来进一步保护，免受损害的影响。快速操作并使用良好的技术对降低破坏这些宝贵的细胞的可能性也至关重要。
正确的工具可以帮您快速、高效操作，而错误的工具会拖慢您的速度并会影响细胞。
您选择的移液器和移液器吸头对从种子和所建细胞系的工作库存中移取细胞都有影响。与水细胞培养基相比，含冷冻保护剂的溶液的表面张力更低。例如，最常用的冷冻保护剂DMSO在20℃时的表面张力约为43mN/m（水的表面张力为73mN/m）。表面张力低，意味着液体覆盖移液器吸头，难以精确移液。使用合适的移液器吸头，如采用抛光处理表面的低吸附吸头，可为您确保冷冻保护剂与细胞悬液之间保持合适正确比例，从而降低冷冻和解冻期间细胞损伤的可能性。
