抗体内化

抗细胞表面抗原的抗体可诱导内吞作用，这会导致此类抗体及与其偶联的分子被细胞内化。该过程称为抗体内化 (ABI)，已经在研究和临床发现领域得到了广泛应用，例如，通过抗体偶联药物 (ADC) 将剧毒药物递送至特定癌细胞，清除或降解癌细胞表面受体（如EGFR），以及通过抗体免疫疗法识别肿瘤细胞以进行免疫细胞杀伤（如ADCC 或 ADCP）。

抗体作为疾病的有效治疗方法在很多领域都具有治疗意义，其中包括癌症、自身免疫性疾病、心血管疾病、炎症和传染病。要开发供临床使用的抗体，必须通过有效的体外功能检测评估其潜在治疗意义。传统 ABI 测定技术通常存在以下问题：

低通量采集，并且由于需要大量样品，因此采样时间比较长（如传统流式细胞术）
检测方法的设置复杂，需要优化信号分辨率和补偿
费力费时，需要抗体标记、优化方案、固定和反复洗涤等步骤
需要手动执行复杂的数据分析
大量使用珍贵样品和抗体

iQue^®抗体内化检测结合 iQue^® 抗体内化分析试剂盒与 iQue^®高通量流式细胞仪，简化了高通量测定抗体内化的工作流程。借助集成式 iQue^® Forecyt 软件，可以节省珍贵样品、时间以及实现实时的药理学分析。通过贴壁或悬浮细胞对一组抗体进行抗体内化量化从未如此简单！

概念

图 1.pH 敏感型荧光探针原理。

全新 pH 敏感型荧光探针能够一步快速免洗标记含血清的完全培养基中的同型匹配抗体。内化抗体进入酸性内体和溶酶体途径后，会产生荧光信号。抗体内化量化为荧光探针检测结果阳性的活细胞百分比。同时使用 iQue^® 细胞膜完整性染料测定细胞活力。

关键优势

最大程度地提高检测效率 - 在高通量抗体发现过程中对一组抗体进行细胞内化测定
灵活的检测形式 - 使用客户指定的悬浮或贴壁细胞模型表征多种临床人源化治疗性抗体
简化数据采集和分析 - 快速收集和分析复杂数据，加快科学决策
以更少的样品量获得更多生物学洞察力 - 同时对在单个孔中共培养的不同类型细胞进行抗体内化评估，大幅减少样品用量

最大程度地提高检测效率

在单个孔中对一组抗体进行细胞内化测定，实现高通量抗体发现

图 2.使用 iQue^® Forecyt^® 高效评估抗体活性。

抗体内化检测使用了 T 细胞，在 384 孔板的每个孔中均生成了丰富的数据。使用抗体内化试剂标记了多种抗体，然后在同一孔中与 T 细胞共孵育。(A) 基于孔板的 T 细胞中不同抗体内化的 HeatMap，便于查看。(B) 系列稀释曲线呈现了 T 细胞中多种标记抗体的内化曲线。

灵活的检测形式

在 96 孔或 384 孔板中使用经验证的试剂快速定量 ADCP，促进您的发现。

图 3.非贴壁细胞和贴壁细胞类型的功能筛选和活性分析。

只需微调方案即可将该检测方法用于贴壁细胞。图中数据显示了两种治疗性抗体（分别是悬浮 Ramos 细胞中的美罗华（抗 CD20）和贴壁 AU565 细胞中的赫赛汀（抗 Her2））浓度与活性的关系，以及同时评估的细胞活力。将细胞接种到 96 孔板中，并加入 ABI 试剂和抗体复合物以及 iQue^® 细胞膜完整性染料，然后孵育 3 小时。悬浮细胞可以直接在 iQue^® 平台上分析，而贴壁细胞需要在分析前仔细分离并重新悬浮。

简化数据采集和分析

快速、轻松地收集、分析和展示复杂数据，加快科学决策

图 4.Her2+ AU565 和 Her2- MDA-MB 468 细胞中的赫赛汀抗体内化。

将细胞接种到 96 孔板中，并使用与赫赛汀类型不同的抗体和 ABI 试剂（A：AU565，B：MDA-MB-468）的复合物进行处理。未在 Her2 细胞中检测到内化。还对 AU565 中的赫赛汀进行了梯度稀释曲线测定 (C)，显示出不同的活性。

以更少的样品量获得更多生物学洞察力

同时对在单个孔中共培养的不同表型细胞进行特定抗体内化评估

图 5.通过对在单个孔中共培养的细胞进行内化分析，仅需少量样品即可获得可靠数据。

将细胞接种到 96 孔板之前，使用不同浓度的无干扰型 iQue^® 细胞编码染料（V/蓝色）对细胞染色。将单独培养的细胞和共培养的细胞放置一夜，使细胞贴壁。加入赫赛汀或 hIgG1 与抗体内化试剂的复合物，3 小时后使用 iQue^® 平台执行分析。通过散点图 (A)，可以根据编码染料轻松识别在同一孔中混合的全部三种细胞。可以对每个细胞群 (B) 执行内化评估，尽可能从检测抗体中获取信息，同时最大程度地减少珍贵样品和检测抗体用量。