Incucyte^® - iQue^® 工作流程

可以对整个肿瘤细胞杀伤过程（> 5 天）进行监测，并可在无干扰情况下采集上清液样品，用于测定细胞因子浓度。

图 1.可以通过结合使用多种技术了解事件发生的先后顺序。

在共培养免疫细胞杀伤分析中观察到 CD3/CD28 Dynabead 活化的影响。将 SKOV-3 细胞以 4,000 个细胞/孔的密度接种，等待 4 小时，使其贴壁。然后，将系列稀释的 Dynabead 添加到孔中，然后再以 10,000 个细胞/孔的密度添加 PBMC。每天采集上清液样品 (10 µL)，用于细胞因子分析。

时间数据显示了事件发生的时间表，从中可以发现，首先观察到细胞因子分泌增加（A、B），然后效应细胞增殖增加 (C)，这导致靶细胞数量减少 (D)。这是在 120 小时内收集的数据。每个数据点代表平均值 ± SEM，n = 3。

• 可以从单个检测板中收集数据并将数据进行汇总，通过共培养模型更深入地了解生物学
• 该工作流程既适用于贴壁靶细胞，也适用于非贴壁靶细胞

图 2.易于遵循的工作流程，结合使用 Incucyte^® 和 iQue^® 进行免疫细胞杀伤分析。

• 自动进行 T 细胞亚群的表型分析和分泌细胞因子的定量分析
• 实时观察和定量分析靶细胞群和效应细胞群的表型变化

图 3a. 各平台之间的靶细胞分析具有可比性。

(A) 相差/荧光图像显示了 SKOV-3 Nuclight 绿色试剂转染的卵巢癌细胞（靶细胞）与未标记的 PBMC（效应细胞）的共培养物。

(B) Incucyte^® 软件可以直接基于图像检测及定量分析靶细胞（有粉色外沿的绿色对象），从而确定靶细胞数量。

(C)  2D 密度图 iQue^® 分析结果表明了如何从阴性 PBMC 细胞群中分离出具有绿色标记的靶细胞。

(D) 靶细胞频率。

图 3b.根据预定义的设门策略自动分析 T 细胞亚群。

TCA 试剂盒方便用户使用，可以鉴定和定量分析 T 细胞活化标志物，并且最大程度地减少了用户干预。

通过结合使用多种技术，可以更深入地了解生物学。

图 4.仅通过一次检测即可定量分析抗体依赖性细胞介导的细胞毒性、细胞相互作用的变化和 T 细胞活化。

在非贴壁靶细胞和 PBMC 的共培养中观察到抗 hCD3xCD19 BiTE 抗体活化的影响。以 15,000 个细胞/孔的密度接种 Ramos 细胞（绿色）。先将 BiTE 抗体添加到孔中，然后再添加 PBMC（75,000 个细胞/孔）。

(A) 荧光强度测定结果的减弱表明，BiTE 抗体诱导杀伤 Ramos 细胞，且呈浓度依赖性。

(B) 细胞聚集也增加并呈浓度依赖性，这是免疫细胞杀伤的标志。将 BiTE 刺激与 Dynabead 刺激进行比较时，观察到 T 细胞活化标志物有所差异

(C, D) 在图像中观察到形态变化

(E, F) 可执行定性鉴定。这是在 72 小时内收集的数据。每个数据点代表平均值 ± SEM，n = 3。