混合淋巴细胞反应 (MLR)

在单孔内获得多种免疫表型和效应细胞因子浓度的读数

图 2. 在单个孔中测定检查点抑制剂药物诱导的细胞因子释放和标志物表达

先将 DC 解冻并活化过夜（使用 IL-4、颗粒酶 B 和 LPS），然后再以 40K/孔的密度将其接种在 96 孔板中。按照 3:1 的 T 细胞与 DC 比例添加使用 B/绿色编码染料标记的 CD4+ T 细胞。添加一系列浓度的检查点抑制剂药物“帕博利珠单抗”（一种抗 PD-1 单克隆抗体），增强 T 细胞活化。在第 2 和 6 天分析细胞因子样品。 在检测终点（第 6 天）分析标志物表达。使用 iQue^® 人 T 细胞活化分析试剂盒和 iQue^® 3 平台分析样品的 (A) IFNγ 释放、(B) TNFα 释放和 (C) CD25 表达。

生成适用于药理学分析的 T 细胞应答测量值

图 3.通过 iQue Forecyt^® 定量分析药物诱导的 T 细胞应答并自动计算 EC50

将 DC（40K/孔）与编码的 CD4+ T 细胞（T 细胞与 DC 比例为 3:1）一起接种，并使用帕博利珠单抗进行处理。在第 2 和 6 天，使用 iQue^® Qbeads^® 人炎症组合试剂盒分析 10 uL 样品。 (A) 每孔 IL-2 (pg/mL) 释放热图。对照孔包含不含药物的 T 细胞和 DC。(B-E) 曲线主要显示的是炎症细胞因子释放随时间和帕博利珠单抗浓度的变化。在第 2 天，帕博利珠单抗对 IL-2 释放影响的 EC50 为 0.53 ug/mL，而到第 6 天，所有 IL-2 生产均已停止。第 2 天到第 6 天，IL-6、CCL2 和 CCL3 水平均上升，第 6 天，CCL2 和 CCL3 释放对应的 EC50 值非常接近，分别是 0.98 和 1.0 ug/mL。

在 96 或 384 孔板中快速量化标志物和细胞因子，促进筛选和分析研究。

图 4.使用 384 孔板分析格式针对多对 PBMC 供体快速分析检查点抑制剂对细胞因子释放的影响

单独接种（单供体对照组）或组合接种（总共 8 对供体）来自多个供体的 PBMC（80K/孔）。用多种浓度的抗 CTLA4 检查点抑制剂抗体处理细胞。PBMC 和 PHA 以及 PBMC 和 MMC 的混合物，分别作为阳性对照和阴性对照。3 天后，使用 IFNγ iQue Qbeads^® 分析样品的细胞因子浓度，并根据标准曲线计算浓度。(A) 热图突出显示了 PBMC 供体对之间抗 CTLA4 诱导 IFNγ 释放的差异。(B) 条形图显示 PBMC 混合物释放的 IFNγ 一直高于单供体对照。这是因为前者添加了 17 ng/mL 抗 CTLA4。(C) 供体对 7 对抗 CTLA4 反应的典型浓度响应曲线 (EC50 = 6.6 ng/mL)

通过实时数据分析和新颖的可视化工具，缩短获得结果的时间

图 5. iQue Forecyt^® 可预设设门及自动分析数据，可即时提供 T 细胞活化数据

按照一定的 T:DC 比例范围将来自两个不同供体的 CD4+ T 细胞分别与来自单供体的 DC 进行共培养。每个 T 细胞供体与 DC 供体的 HLA 等位基因错配程度不同。供体 1 T 细胞的 HLA 图谱与 DC 供体更相似，等位基因错配比例只有 3/8（2 个 HLA-A、-B、-C 和 -DR 等位基因），而对于供体 2 T 细胞，两者的等位基因错配比例则高达 7/8。对照包括单独培养的 T 细胞（阴性）或者 T 细胞与 Dynabead 或 Immunocult 的共培养物（阳性）。使用 iQue^® 人 T 细胞活化分析试剂盒进行分析。(A) 板视图显示了孔间 CD4+ 细胞群中 CD25 表达的差异。T 细胞活化随着 T:DC 比例的减小而增强，供体 2 T 细胞更强。这在意料之中，因为 HLA 等位基因错配程度高有助于对“非自体”细胞的识别。(B) 和 (C) 轮廓线图显示了供体 1 和供体 2 的 CD25 阳性 T 细胞百分比（T:DC 比例是 3:1）。(D) 条形图显示了 CD4+ 细胞群中 CD25 细胞的定量分析结果 (%)。