T 细胞杀伤 - 细胞和细胞因子分析

T 细胞杀伤

细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL) 是免疫系统的重要组成部分，在感染细胞和恶性细胞的清除中扮演者重要的角色。CTL 是免疫系统的功能性 (CD8+) 细胞亚群，可释放穿孔素，在靶细胞膜上形成孔洞，颗粒酶通过这些孔洞进入细胞，诱导靶细胞凋亡。

免疫细胞诱导的细胞毒性可通过各种治疗药物诱导（例如，单克隆抗体、BiTE、CAR 和 Truck）。免疫系统被视为对抗癌症的有力手段，并且在肿瘤免疫学领域已有所成效。研究 T 细胞表型和细胞毒性功能的传统技术通常：

需要使用单独的仪器分开进行细胞因子、细胞毒性和标志物表达的分析
使用耗费人力的间接细胞毒性测定方法，例如铬释放实验
需要人工分析并从多个来源汇总数据
工作流程冗长、耗时；需要诸如方案优化、固定和反复清洗的步骤

iQue^® 人 T 细胞杀伤分析应用，可利用 iQue^® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒对靶细胞杀伤、T 细胞表型和活化标志物的表达进行同步、高通量的分析，以及对效应蛋白和细胞因子的分泌进行定量。结合 iQue^® 高通量流式细胞仪的强大功能和集成式 iQue^® ForeCyt^® 软件的实时数据分析，可为您提供简化的解决方案，改进肿瘤免疫学药物发现过程。

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检测原理

图 1. iQue^® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒的分析原理示意图。

通过 CD8+ T 细胞的状态分析，可检测活化标志物 CD25 和耗竭标志物 PD-1，还可以使用 2-plex Qbeads，通过夹心法免疫分析，在同一孔中定量分析 2 种效应细胞因子（IFNγ 和颗粒酶 B）。您可以同时测定 T 细胞增殖或编码的靶细胞，但本示意图中未包含此分析。

关键优势

洞察生物学结果

在生理相关的模型中评估 T 细胞杀伤

图 2.CD3×CD19 双特异性 T 细胞单链抗体 (BiTE) 在 6 天内可导致浓度依赖性的细胞杀伤、标志物表达和细胞因子释放。

将带有 Incucyte^® Nuclight 绿色标记的 Ramos 细胞（15 K/孔）与 PBMCs（75 K/孔）接种到孔板中，进行共培养。使用 CD3×CD19 BiTE 抗体诱导活化。将细胞破碎，然后用 iQue^® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒分析细胞和上清液。(A) 靶细胞的活力在 6 天中呈浓度依赖性降低。(B) T 细胞活化标志物和 (C) 耗竭标志物在 CD8+ 细胞上的表达上升，至第 3 天，然后开始降低。(D) 释放的 IFNγ 和 (E) 颗粒酶 B 的浓度。

提高分析效率

在细胞和微球混合分析中，同时测定标志物的表达和分泌的细胞因子

图 3.应用 Immunocult CD3/CD28/CD2 活化因子诱导 T 细胞活化、耗竭和杀伤标志物的浓度和时间依赖性变化。

将带有 Incucyte^® Nuclight 绿色标记的 Ramos 细胞（15 K/孔）与 PBMCs（75 K/孔）接种到孔板中，进行共培养。使用 Immunocult CD3/CD28/CD2 诱导活化，采用的最高浓度等同于建议的刺激浓度（25 µL 每 1e6 个细胞/mL）。将细胞破碎，然后用 iQue^® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒分析细胞和上清液。(A) 晚期活化的 T 细胞 (CD25) 在 CD8+ 细胞上的表达。(B) T 细胞耗竭 (PD-1) 在 CD8+ 细胞上的表达。(C) 释放的 IFNγ 和 (D) 颗粒酶 B 的浓度。

简化数据分析

实时数据分析和创新的可视化工具，支持快速生成定量读数

图 4.采用 iQue^® ForeCyt^® 上的预定义设门进行 T 细胞亚群的自动表型分析

将来自 3 个不同供体的 PBMCs（120 K/孔）与带有 Incucyte^®Nuclight 绿色标记的 Ramos 细胞（40 K/孔）共培养，并用数量递增的 Dynabead CD3/CD28 进行活化。在第 3 天，使用 iQue^® 人 T 细胞杀伤分析试剂盒进行分析。(A) 重叠图像展示了阳性（4:1，Dynabead:PBMC）和阴性（无 Dynabead）对照中 CD25 表达的差异。(B) 热图显示了来自每个供体的 PBMC 上 CD25 的表达（响应 Dynabead）。在较低的 Dynabead 密度下，供体 2 形成表型的敏感性要强于供体 1 和供体 3。(C) 图中将来自 (B) 图的数据汇总为浓度响应曲线。