用于免疫细胞功能的记忆 T 细胞

图 2.细胞因子的刺激可以使具有高度自我更新能力的记忆细胞维持 5 天以上。

将 PBMCs（100 K/孔）接种，进行单一培养，加入“核心”细胞因子（IL-4，100 ng/mL 和 IL-7，10 ng/mL）和 Dynabead CD3/CD28（25 K/孔）。使用各种组合的细胞因子（L-15，10 ng/mL；IL-6、IL-21 和 IFNß，100 ng/mL）处理细胞，并在第 2 天和第 5 天取样 10 µL，采用 iQue^® 人 T 细胞记忆分析试剂盒进行分析。

使用 IFNß（斜纹条柱）可使 IL-10 的分泌增加，同时也将 CD8+ 中央记忆型 T 细胞的比例提高到 3 倍，而 IFNß 与白介素（例如 IL-6）联用没有增加 IL-10 的分泌或 T_CM 的数量。

图中展示的数据来自大型 panel 分析，该分析设计用于优化过继细胞疗法生物制造的培养条件。热图显示了所有测试的处理中的 TCM 细胞。蓝色框标出的是经 IFNß 处理，且与其他处理类型相比具有更高 T_CM 细胞比例的孔。

图 3.  诱导 T 细胞的 CAR 表达时，具有高度自我更新能力的记忆细胞并不是总能保留。

HER-2 和 CD19 CAR-T 细胞经冻融处理。使用 Dynabead CD3/CD28 将来自相同供体的对照 T 细胞活化 3 天。用 T 细胞记忆抗体 panel 标记细胞（100 K/孔，5 个重复）以评估表型。(A) 图中显示了 T 细胞发育为不同的记忆 T 细胞表型时表面标志物表达的改变。从左到右分别为：初始 T 细胞 (T_N)、干细胞样记忆 T 细胞 (T_SCM)、中央记忆型 T 细胞 (T_CM)、移行记忆 T 细胞 (T_TM)、效应记忆 T 细胞 (T_EM)、末端效应 T 细胞 (T_TE)、细胞死亡。(B) 活化的 T 细胞，(C) HER-2 CAR-T 记忆细胞表型，(D) CD19 CAR-T 记忆细胞表型。

图 4.不同供体的记忆 T 细胞发育变化。

将来自 3 个单独供体的 PBMCs（120 K/孔）与 Ramos 细胞共培养（3:1 E:T 比例），并用数量递增的 Dynabead CD3/CD28 进行活化。在 72 h 时，使用 iQue^® 人 T 细胞记忆分析试剂盒分析 10 µL 样本。

(A) 供体 1，(B) 供体 2，(C) 供体 3，三张图表中展示了在记忆 T 细胞发育的各个阶段表达蛋白的 CD3+ 细胞百分比和 IL-10 的释放数据。图中的蓝色柱代表没有活化因子的对照组。灰色柱代表 3 个依次递增的 Dynabead 浓度（由浅至深）：60 K、120 K 和 480 K 微珠/孔。

图 5.利用 iQue^® ForeCyt^® 上的预先设门功能进行 T 细胞亚群的自动表型分析

使用各种密度的 Dynabead CD3/CD28 对来自 3 个不同供体的 PBMC（120 K/孔）进行活化。在第 3 天，使用 iQue^® 人 T 细胞记忆分析试剂盒进行分析。(A) 图中展示了用于区分记忆 T 细胞集群的中央记忆型 T 细胞 (T_CM)、移行记忆 T 细胞 (T_TM)，以及效应记忆 T 细胞 (T_EM) 的设门策略。(B) 热图中展示了来自每个供体的表达 T_EM 表型的 T 细胞比例。在较低的 Dynabead 密度下，供体 2 形成 T_EM 表型的敏感性要强于供体 1 和供体 3。(C) 图中将来自 (B) 图的数据汇总为浓度响应曲线。

图 6.使用清晰易懂的方案，通过 iQue^® 人 T 细胞记忆分析试剂盒进行 T 细胞表型和细胞因子释放分析。

采用细胞和微球混合分析，采集单个孔中的细胞标志物表达数据和上清液细胞因子的浓度数据。这一简化的工作流程不需要进行额外的优化或稀释操作，仅需要一个清洗步骤，助您尽可能缩短获得结果的时间。