为什么研究细胞周期？

使用基于图像的测量结果，追踪各种细胞类型中多个细胞分裂的细胞周期进程。利用您的培养箱所提供的稳定培养环境与我们的新型 Incucyte^® 细胞周期慢病毒试剂（不干扰细胞健康和形态），保持生理相关性。

图 1. 通过自动化图像采集和集成式分析，生成基于图像的多个细胞分裂中细胞周期转变的测量结果。感染 Incucyte^® 细胞周期绿色/红色慢病毒的 HeLa 细胞在 G1 期表现出红色荧光，在 S/G2/M 期表现出绿色荧光 (A)。黄色细胞正在从 G1 期过渡到 S 期，而非荧光细胞则正在从 M 期转变至 G1 期。使用 Incucyte^® Cell-by-Cell 分析进行定量，可实现如黄色 mask 所示的准确掩膜处理 (B)，并基于红色和绿色荧光进行分类（C 和 D）。图 E 显示了细胞周期持续时间的定量结果，其中将转染有 Incucyte^® 细胞周期绿色/红色慢病毒的 HeLa 细胞用胸苷（2.5 mM，24 h）处理以将细胞阻止在 S/G2/M 期。解除该阻断后，细胞发生同步分裂 (M-G1-S/G2/M)。数据显示，细胞周期为 17 h（峰间持续时间）。显示的数据为 6 个孔的平均值 ± SEM。

图 2. 通过无干扰试剂在活细胞内产生直接测量结果。将 Incucyte^® 细胞周期绿色/红色慢病毒稳定地引入细胞的过程不产生干扰。图像显示，亲本细胞与转染后的 MDA-MB-231 细胞表现出相同的形态，并且图像分析表明对细胞生长没有影响。

利用 Incucyte^® 方便易用的端到端解决方案，加快获得结果的速度。遵循简单的活细胞标记方案 - 无需进行细胞固定和分离操作。使用简便易用的专用软件工具，在 96 孔或 384 孔板中自动采集和分析。使用 Incucyte^® Cell-by-Cell 分析软件模块轻松生成图表以揭示细胞周期阶段分布的动力学变化。

图 3 .Incucyte^® 细胞周期慢病毒快速指南。使用简单的标记方案稳定地表达荧光泛素化细胞周期指示剂 (FUCCI) - 无需进行细胞固定和分离操作。

将 Incucyte^® 细胞周期慢病毒与 Cell-by-Cell 分析相结合，追踪单独鉴别的细胞周期阶段以评价药物治疗效果，或将药物诱导的细胞周期停滞与细胞分化联系起来。

图 4. 测量随时间推移，药物对细胞周期阶段分布的影响。经顺铂或 5-氟尿嘧啶 (5FU) 处理后，HT1080 纤维肉瘤细胞分裂的时程。 在表达 Incucyte^® 细胞周期绿色/红色慢病毒的 HT1080 细胞中测定细胞周期阶段。 使用 Cell-by-Cell 分析软件分析图像，并基于绿色和红色荧光对细胞亚群进行分类。 微孔板视图（顶行）显示了顺铂和 5FU 相比于溶媒在 30 h 内对 G1 期（红色细胞群）、S/G2/M 期（绿色细胞群）和 G1-S 期（橙色细胞群）的浓度和时间依赖性影响。 在处理后 24 h 采集的浓度响应曲线（底行）显示，经顺铂处理后，处于 G1 期的细胞群减少，处于 S/G2/M 期的细胞群增加，且处于 G-S 期的细胞群减少，与其干扰有丝分裂的效应一致。 经 5FU 处理后，处于 G1 期的细胞群增加，处于 S/G2/M 期和 G1-S 期的细胞群减少，与其对 DNA 合成的影响一致。显示的值为 6 个孔的平均值 ± SEM。

图 5. 观察药物诱导的细胞周期停滞对细胞形态和功能的影响。将稳定表达 Incucyte^® 细胞周期绿色/红色慢病毒的 THP-1 单核细胞暴露于溶媒或佛波醇 12-十四酸酯 13-乙酸酯 (PMA; 100 nM)，并使用 Cell-by-Cell 分析软件分析。PMA 导致细胞分化，使细胞周期停滞在 G1 期 (A)。分析表明，与溶媒处理后的细胞相比，缺乏增殖 (B)，红色细胞（处于 G1 期）百分比增加，绿色细胞（处于 S/G2/M 期）减少 (C)。使用 Incucyte^® pHrodo^® 红色细胞标记的凋亡 Jurkat 细胞的胞葬作用 (E) 显示，PMA 处理后的细胞面积也更大 (D)，表明细胞形态会随着吞噬能力的增加相应改变。