细菌菌落自动转移

CellCelector实现自动化的单细胞和克隆筛选及分离,为生物技术及药学研究赋能

工业生产中,细菌被广泛应用于生产一些酶和其他有机分子,如酒精。此外,人们对开发用于生产抗体和其他药物的细菌宿主系统也有极大兴趣,这是因为与主流的哺乳动物宿主系统相比,细菌宿主系统产量更高,成本更低。

通过将所需产物的基因插入质粒中,然后转导入细菌中。然而,并不是所有转导到细菌中的质粒都含有插入的基因片段。蓝白斑筛选是一种常用的方法,用于鉴定细菌是否由带有所需产物基因的质粒转化而来。含有插入片段质粒的细菌呈白色,而不含有插入片段质粒的细菌呈蓝色,此方法能够很容易地检测出阳性细菌。

生产工艺的自动化对于提高通量和优化产量非常有益。CellCelector 能够自动选择和分离阳性细菌菌落进行评价和进一步下游工艺开发。

细菌菌落分离工作流程

第 1 步:扫描和成像


扫描过程
将带有细菌菌落的培养皿放置在源板载物台上(A);
扫描后的概览图像 (B);
荧光照明放大区域 (C)。

第 2 步:检测目标菌落


通过定义灰度阈值进行菌落检测
参考图像 (C) 的灰度值图形视图 (A)。通过移动上限(蓝色条)和下限(红色条),可以定义一系列灰度值(绿色条)以用于检测。参考图像上检出的菌落 (D);总扫描区域上检出的菌落(概览图像 B)。

第 3 步:细菌菌落的自动采集


半固体培养基挑取模块 - 开发用于从半液体培养基(例如甲基纤维素)和固体培养基(例如琼脂)中挑取细胞集落。

机械臂自动从毛细管架上更换安装新的挑头后立即进行挑取(左图);
捕获工具在含有Deinococcus的荧光照明琼脂糖培养皿内进行捕获程序(右图)。

第 4 步:记录


从琼脂糖培养皿中分离出Deinococcus的记录档案。菌落分离前(左)和后(右)的培养皿区别。

应用实例:从琼脂平板中精确分离Deinococcus

Deinococcus是一种对多种刺激(辐射、氧化、热、干旱、冷、溶剂、碱、酸、乙醇、丁醇等)具有较高抗性的细菌。此外,该细菌的生成时间较短(约 80 min),能够利用大量糖、氨基酸和有机酸作为分解代谢的碳源,在工业中有着广泛用途。此外,Deinococcus能够以高度稳定的方式整合来自细菌、真菌和植物的大量DNA片段,因此能够产生高度复杂的化合物,如类胡萝卜素、酶、抗生素等。

从琼脂平板上挑取Deinococcus菌落的实验总结
图像显示了 5 个菌落(ID 为 24、119、111、57 和 53)挑取前后的图像记录、转移至目标孔内的图像、以及完整的菌源培养皿中的情况。
通过 CellCelector 系统自动采集和保存整个培养皿挑选前后的图像和总览图像。
24 号菌落有荧光。

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