高表达克隆的筛选和分离在抗体生产中的应用
在抗体生产中，开发新细胞系的一个基本步骤是鉴定可稳定产生高水平靶蛋白的单细胞衍生克隆。与传统技术耗时耗力的步骤相比，使用 CellCelector 可以更有效地进行生产率筛选。
高产克隆的筛选和分离
在通过杂交瘤克隆生成抗体时，不同克隆之间可能存在巨大差异。由克隆产生并分泌到培养基中的蛋白可以通过荧光标记的二抗来显像。由于半固体培养基的粘度较大，阻止抗体进一步扩散到培养基中，信号将在产生抗体的细胞克隆周围显示为荧光晕。CellCelector 软件通过比较明场视野下可见的细胞团大小和细胞团周围荧光晕的大小，计算每个克隆的抗体生产率，从而选出高产克隆。用户可以通过该方法对来自多个培养板的细胞克隆进行排序，以获得最佳的高产克隆。
杂交瘤克隆（浅蓝色）以及荧光标记二抗（绿色带黄色圆圈）检测分泌抗体（深蓝色）的示意图 (A-C)
使用荧光标记二抗孵育后的杂交瘤克隆的显微镜视图（明场和荧光的叠加）(D-F)。
抗体产生强度与集落周围荧光晕的直径相关：不产生抗体的克隆团（A 和 D）；产生中等量抗体的克隆团（B 和 E）；产生大量抗体的克隆团，即高产克隆团（C 和 F）。克隆团大小相似（见 D-F 中的放大区域，即明场观察结果）。
产生抗体的 CHO 细胞团；使用 CellCelector 的半固体培养基模块进行挑取前后的 QC 图像。
用半固体培养基挑取模块收集并转移到96孔目标板上培养的CHO细胞团（转移后第1天和第5天）。
使用 CellCelector 从甲基纤维素和其他半固体培养基中筛选单克隆的优势
使用一次性挑头
- 使用一次性塑料挑头，在每次筛选时自动更换，避免交叉污染和喷嘴堵塞。
- 即用即抛，无需清洗污染的挑头。
- 多种内径规格，适用于不同克隆尺寸。
特点
- 从一批检测板中选出排名靠前的优质克隆体：首先扫描所有平板，然后逐板挑选。
- 控制低吸入量和速度，防止同时挑取到相邻克隆。
- 挑取过程中自动验证相邻克隆的移动，确保所有目标克隆在抽吸前自动重新居中。
- 在临近挑取前自动分析目标克隆周围的区域，避免了挑到相邻太近的克隆。
- 用户可定义的分选和排序策略，例如克隆质量、大小或生产率的排序。
高分辨率光学元件和智能成像系统
- 检测大克隆附近的小克隆团或单细胞，确保对目标克隆进行单克隆分离，帮助开发新细胞系。
- 可以通过分析集落的结构并定义形态学参数（例如球度和形状）来排除可疑（例如细长）的克隆。
- 可通过显微图像（挑取前后的图像）进行质量控制，并获取挑取过程中的实时图像。
可定制性和灵活性
- 多达6 个荧光通道；可根据客户应用要求定制其他荧光通道。
- 适用标准以及定制的细胞源板和转移目标板。
- 支持上游和下游自动化集成。
- 可整合到FlowBox 孵育箱中进行长时间检测。
相关文献
- Zoldan, K. et al. Automated clonal selection of high-producing hybridoma colonies from methylcellulose-based, semi-solid medium using the cell separation robot CellCelectorTM nature methods application notes (2010)
- Caron A.W. et al. Fluorescent labeling in semi-solid medium for selection of mammalian cells secreting high-levels of recombinant proteins (CHO) BMC Biotechnol. 9: 42 (2009)
- Julien, A. et al. Antigen specific antibody-producing clones selected by isotypes Biosystems International Application Note
- Gilbert, R. Fluorescent labeling in Semi-Solid Medium to Identify High Expressing Clones for Recombinant Protein Production (CHO) CHI's Bioprocessing Summit Presentation, Boston 2011