HSC子细胞分离或“双细胞分离”
造血干细胞 (HSC) 在造血系统中占据顶端地位,负责建立和维持功能性血液系统。HSC 凭借其可自我更新以及可生成各种造血系统血细胞的特性发挥其独特的作用。因此,自我更新和分化的平衡对于我们血液系统的健康功能而言至关重要。
然而,导致一种或另一种干细胞命运的动力学还尚未明确。CFC实验是研究命运决策的备选方法之一(请参考 造血干细胞集落)。然而,CFC 试验只能研究单个干细胞或祖细胞的集落形成,无法区分这些集落内的单细胞。因此,研究细胞命运决策的另一个选择是在分子和功能试验如单细胞测序或移植试验中,在单细胞水平上研究源于一个“母”HSC 的“子”细胞。
然而,这些方法都需要先分离单个“子”细胞(此处也称为“Doublets 分裂”)。尤其是对于功能和表达实验,必须在对细胞分子程序影响尽量小的条件下进行造血干细胞分裂。通常通过 FACS 从骨髓或血液样本中分离 HSC细胞。然而,由于总体细胞数量较少(最多 2 个子细胞),无法通过此方法进行 Doublets 分裂。过去,研究人员通过连续稀释来进行 Doublets 分裂,即将细胞从一个孔移液到另一个孔,直到得到单个细胞。然而,这种方法并不温和,损伤风险高,甚至可能导致细胞松散。此外,双细胞“难分难舍”的特性导致连续稀释法的成功率较低。
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