BLI检测技术对ADC药物研发及活性检测应用

蛋白质分析药物研发与质控

24年4月29日 | 8 分钟阅读时间

为规范和指导ADC产品的研发与上市申报，国家药品监督管理局药品审评中心组织制定了《抗体偶联药物药学研究与评价技术指导原则》（下称《指导原则》）,并于2024年初正式发布^[1]。《指导原则》详细阐述了ADC生产工艺的开发、确认与验证、以及质量研究与标准等内容。其中，生物层干涉技术（Biolayer Interferometry，BLI）被列为检测结合活性的方法之一！

《指导原则》的封面和目录

生物层干涉技术被列为检测结合活性的方法之一

作为生物层干涉技术（BLI）的开创者和引领者，赛多利斯一直致力于推动相关法规的完善。2020年，BLI作为非标记检测方法被列入《美国药典》检测分子相互作用的方法之一。在国内，基于BLI技术的Octet^® 非标记分子互作分析系统也深受广大用户的青睐与认可，广泛应用于包括ADC在内的众多研究领域。行业发展与应用实践共同推动了BLI技术被正式写入《抗体偶联药物药学研究与评价技术指导原则》，实现了此技术在国内发展的又一里程碑。今天，我们就通过几个案例来聊聊BLI 技术在ADC领域的应用。

案例1——百利天恒药业：BL-B01D1

BL-B01D1是一款针对EGFR/HER3的四价双特异性抗体（SI-B001）的ADC药物，出海后的总交易额约为84亿美元（Hot! 84亿美金的双抗ADC结构设计与结合活性选择）。BL-B01D1来源于SI-B001（又称为SI-1X6.4）四价双特异性抗体，其相关专利^[2]描述了如何利用Octet^® 系统分析SI-1X6.4的结合活性。

Octet^® 检测不同候选产物（含SI-1X6.4）与HER3的亲和力

除了亲和力检测，还利用Octet^®验证了SI1X6.4可以同时结合HER3和EGFR，从而表明它可能具备双特异性抗体1+1＞2的功效。研究还通过使用Octet^® AHC传感器捕获SI1X6.4，依次结合EGFR抗原与HER3抗原。

Octet^® 发现SI1X6.4可以同时结合HER3和EGFR（抗体已经固化在传感器上）；Octet^® 检测结果意味着BL-B01D1一端与抗原结合后并不影响另一端与抗原的结合

案例2——荣昌药业：RC48

荣昌药业推出的RC48是HER2人源化抗体（Hertuzumab）与微管干扰小分子药物（MMAE）偶联的一款ADC药物，也是首个上市的国产ADC药物。使用Octet^® 检测不同DAR(一个抗体上偶联的小分子平均数量)偶联的抗体与抗原的亲和力，发现不同DAR偶联的ADC与抗原的亲和力没有影响，KD值均为nM级别^[3]。

Octet^®数据：使用Octet^® ProA传感器固化抗体，与不同浓度的Her2抗原进行结合解离，并计算结合动力学常数

案例3——默克公司新型ADC的Fc受体亲和力研究^[4]

可结晶片段（Fc） -抗原结合片段（Fcabs）代表了一种新型抗体形式，其分子量远小于全长抗体，将小分子偶联在Fcabs上制成的ADC可以提高组织穿透能力，对实体瘤治疗有一定吸引力。而Fc受体结合活性与抗体的ADCC、CDC以及半衰期息息相关。《指导原则》的“3.2生物学活性部分”中，也提到了“若Fc介导的效应子功能（ADCC、CDC、ADCP等）可能影响药物的有效性，或表现出效应子结合功能相关的非特异性毒性，则应进行相应的生物学活性评估”。本文利用Octet^® 检测不同连接子的ADC与FcRn和抗原的亲和力，发现偶联小分子药物后的Fcabs不会改变Fc受体的亲和力。

Octet^® 数据：使用HIS1K传感器固化FcRn，结合不同连接子的抗体

案例4——卫材：MORAb-202

Farletuzumab ecteribulin (MORAb-202) 是一种抗体-活性分子偶联物 (ADC)，由人源化抗人叶酸受体α(FRA)抗体Farletuzumab(HY-P99153)通过二硫键与小分子药物eribulin偶联而成。Farletuzumab ecteribulin 的DAR为 4.0。百时美施贵宝公司以31亿美元获得其权益。《指导原则》中，DAR是必须要检测的ADC的质量属性之一。卫材使用Octet^® 开发了ADC的DAR的检测方法^[5]。