如何高效捕获病毒？使用赛多利斯除病毒过滤器和离子交换膜层析技术
Sartobind® Lab 离子交换膜层析技术具有较大孔隙可以让目标分子通过基质进行对流运动，且对大颗粒样品如病毒没有物理截留因此可以实现高效的捕获和洗脱。其高效捕获病毒的优势也被用于病毒的去除。
为确保生物制剂的安全性，生物制药生产的下游工艺至少须包含 3 种不同的病毒清除和灭活方法。同时还须证明方法的稳健性。可以使用不同方法，如过滤，以及用紫外线、热或化学处理进行灭活及采用离子交换层析法清除病毒。
在本研究中，我们选用噬菌体 PR772（属于二十面体双链 DNA噬菌体的复层噬菌体科）作为评估病毒清除效率模型。胃肠外药物协会病毒过滤工作组已将 PR772 选为噬菌体模型，以规范大孔径病毒过滤器的命名。
在本研究中，我们摸索出了噬菌体PR772的最佳结合条件，并估算Sartobind® Lab 膜层析柱（图 1）对噬菌体 PR772的 结合能力和适合的流速。我们证实 Sartobind® Lab 层析膜可有效捕获病毒模型噬菌体 PR772。
实验主要材料
图1. Sartobind® Lab S 75和Q 75膜层析柱
实验方法
1 | 平衡纯化柱 (5床体积) | 上样缓冲液 1：20 mM 乙酸钠 pH 5 上样缓冲液2：20 mM 磷酸二氢钾 pH7 上样缓冲液3：50 mM Tris - HCl pH9 |
2 | 0.1μm 过滤噬菌体悬浮液 | 使用大肠杆菌 K - 12培养物制备 PR772 噬菌体悬浮液，并稀释成107~108 PFU/ml。 |
3 | 加载噬菌体悬液 | |
4 | 清洗纯化柱 (7.5床体积) | 使用上样缓冲液 |
5 | 洗脱 (10柱体积) | 洗脱缓冲液：含1M NaCl |
6 | 清洗纯化柱 (7.5床体积) | 使用上样缓冲液 |
7 | 再生和平衡 | 1M NaOH进行再生，上样缓冲液进行平衡 |
实验结果
对于 PR772 噬菌体，根据使用阳离子和阴离子交换膜进行的筛选实验得出的结果，估计其 pI 值大约为 4。进一步的pH 稳定性测量表明，这些噬菌体在 pH 值范围为 5 到 9 时很稳定。在优化条件下，PR772 噬菌体可达到 LRV为7的对数下降。且在穿柱液（清洗和洗脱）馏分中检测不到 PFU。Sartobind® Lab在 50 mL / min (25 MV/min) 的超快流速下，也能达到这种捕获效率，证明层析膜可以进行快速的病毒捕获，也可作为快速、有效的病毒清除手段。
下载应用说明《使用 Sartobind® Lab 离子交换膜层析法捕获噬菌体 PR772》
