什么是抗体内化?

抗原介导的抗体内化在几种基于抗体的疗法中具有重要作用。应用抗体作为治疗剂并将其递送到目标部位或靶细胞受到越来越多地关注,其有望提高疗效并减少潜在的副作用。在许多领域中治疗性抗体可作为有效的疾病治疗方法,例如自身免疫、癌症和炎症、心血管疾病和传染性疾病以及许多其他疾病。

当前的研究和治疗前景
抗体发现领域的抗体内化和靶向介导的内化包括:通过抗体偶联药物 (ADC) 将剧毒药物递送至肿瘤细胞,去除或降解肿瘤细胞的表面受体(即 EGFR),以及用于识别肿瘤细胞以进行免疫细胞杀伤(即 ADCC 或 ADCP)的抗体免疫疗法。此外,检测并优化对抗体的功能效应(例如抗体清除率)也很重要。胞饮作用是抗体的主要消除途径之一,在抗体开发过程中需要优化抗体以进行药代动力学定性测定。

由于每种方法都需要一系列抗体特征,例如,为了能够保持在细胞表面以识别肿瘤细胞或在递送 ADC 时快速内化,了解候选抗体的摄入特征和清除率对于获得最佳的抗体工程改造和内化特性非常重要。

扩展和改进现有方法
目前的方法有局限性,因为需要对每种抗体进行费时费力的标记,需要洗涤步骤,和/或只能进行单一时间点的分析。这可能导致不必要且冗长的操作过程、细胞损失或者由于只能进行单一时间点分析而导致检测遗漏和错误。因此,在整个抗体筛选和功能表征过程中,迫切需要一种高效且价格合理的方法,通过实时活细胞分析全面快速地定量抗体内化。


解决方案

赛多利斯非常荣幸能够推出一种可与人类、小鼠和大鼠测试抗体兼容的新型解决方案(使用 Incucyte® 人、小鼠 IgG1 或大鼠 FabFluor-pH 红色抗体标记试剂或 Incucyte® 人 FabFluor-pH 橙色抗体标记试剂),该解决方案可实现抗体内化的快速、动力学、高通量分析。

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应用

Incucyte® 抗体内化分析方案简介

一种集成式解决方案,可在您的组织培养箱内以 96 孔形式实时自动完成抗体内化的可视化和定量。

(视频)使用 Incucyte® 活细胞分析系统和 Incucyte® Fabfluor-pH 抗体标记试剂对抗体内化进行动力学监测。 

在 BT-474 细胞中,赫赛汀在 12 小时内表现出阳性响应(如测定的红色荧光所示)。使用 IgG 同型作为阴性对照。

下载 Incucyte® Fabfluor-pH 抗体标记试剂产品指南

关键优势

Incucyte® 抗体内化分析方案的关键优势

了解更多信息

将内化的灵敏动力学荧光测量结果与图像和视频相结合,据此进行目视确认

Incucyte® Fabfluor-pH 抗体标记试剂和 Incucyte® 活细胞分析系统能够利用信息丰富的分析和简单的工作流程提供新的见解。可在短短 1 小时内获得内化信号,然后随时间的推移比较内化速率。

您是否知道?

全新的 Incucyte® 集成式软件可提供无与伦比的易用性以及活细胞成像和分析功能。了解更多

使用 Incucyte® Fabfluor-pH 抗体标记试剂和自动化分析工具可轻松地可视化并检测抗体内化随时间的变化。

将 HT1080 细胞用 Incucyte® Fabfluor-pH 标记的 α-CD71 或 IgG1 同型对照 (4 µg/mL) 进行处理,在 12 小时内每 30 分钟采集一次 HD 相和红色荧光图像,所用放大倍数为 10 倍。经 Fabfluor-α-CD71 处理的细胞图像在细胞质中显示出红色荧光 (A)。经标记的同型对照处理的细胞不显示荧光 (B)。自动生成随时间推移的红色对象区域,显示在经标记的 α-CD71 处理的细胞中迅速增加,而经同型对照处理后的细胞中则没有信号 (C)。所示图像在处理后 6 小时采集得到,显示的数据为 3 个孔的平均值 ± SEM。

区分由细胞表面抗原表达驱动的多种细胞类型的内化响应的差异。

将 Jurkat(T 细胞样)和 Raji(B 细胞样)细胞(30,000 个细胞/孔)用各种 Incucyte® Fabfluor-pH 标记的抗体 (4 µg/mL) 处理以显示特定的性质。使用 20 倍物镜在 12 小时内每 30 分钟采集一次高清相位和红色荧光图像。时程数据(A 和 B)表明,两种细胞系中的响应特征与所测试的标记的预期表达谱相匹配,并且证实内化响应仅在表达特定抗原时才会出现。请注意,该分析方法可以区分 Raji 细胞相比于 Jurkat 细胞的响应差异(α-CD71 的响应曲线更陡峭,因此内化速率更快)。曲线下面积 (AUC) 分析展示了两种细胞系的总体特征 (C)。显示的所有数据均为至少 4 个孔的平均值 ± SEM,所示时程数据为归一化的红色区域。

揭示浓度依赖性响应并进行药理分析。

使用简单的即混即读方案,用浓度不断增加的 Fabfluor-pH 标记的赫赛汀处理 BT-474 Her2 阳性细胞。时程图显示,随着赫赛汀浓度的增加,归一化的红色区域随时间推移不断增加 (A);该响应的曲线下面积分析表现出明显的浓度依赖性响应,EC50 为 323 ng/mL (B)。显示的所有数据均为 3 个孔的平均值 ± SEM,所示时程数据为归一化的红色区域。

快速、一步标记与即混即读方案配合使用,可高效检测抗体 Panel

快速标记多种测试抗体,然后使用简单的即混即读试剂检测抗体内化。无需标记优化或洗涤步骤。可在 15 分钟内完成对一组抗体的标记。

可获得高通量、可重现的抗体筛选数据,洞察关键功能,释放您的抗体发现潜力

以 96 孔或 384 孔形式筛选大量抗体,生成一致的、细胞特异性内化响应数据,以充分表征测试抗体。

使用 Incucyte® Fabfluor-pH 标记的抗体实现稳定的功能抗体筛选。

在 HT1080 细胞中头对头测试 6 种不同的 CD71 抗体,其中包括一种来自 2 家不同供应商的克隆(克隆 1a 和 1b)。使用 Incucyte® Fabfluor-pH 抗体标记试剂一步即可标记抗体,然后将抗体加入细胞中,并使用 10 倍放大倍数在 12 小时内每 30 分钟捕获一次内化信号。来自 Incucyte® 的样品板视图在第 11 列和第 12 列中表现出清晰的阳性和阴性对照响应,两个样品板上的各种抗体产生浓度依赖性响应 (A)。12 小时的对照响应表现出明显的阳性响应,生成的 Z' 值为 0.86 和 0.77 (B)。抗体数据的头对头分析显示了这些克隆之间的一系列响应 (B)。显示的所有数据均为 3 个孔的平均值 +SEM,且所示对照数据为 8 个孔的平均值。

常用分析

Incucyte®

流式细胞仪

荧光显微镜

生物学信息

实时细胞可视化

 

 

高灵敏度

  

 

速率测量

 
分析效率

集成分析

 

即混即读方案

 

96 孔通量

 


 

Incucyte® Fabfluor-pH

最大竞争对手

直接标记

实时细胞可视化

 

 

高灵敏度

  

速率测量

 


表 1.

Incucyte® 活细胞分析系统与传统方法之间的比较以及 Incucyte® Fabfluor-pH 与其他试剂和直接标记方法之间的比较;凸显出了 Incucyte® 的优势

订购信息

订购信息

产品

数量

产品目录号

Incucyte® 人 Fabfluor-pH 红色抗体标记试剂

1 瓶 (50 µg)

4722

Incucyte® 小鼠 IgG1 Fabfluor-pH 红色抗体标记试剂

1 瓶 (50 µg)

4723

Incucyte® 大鼠 Fabfluor-pH 红色抗体标记试剂

1 瓶 (50 µg)

4737

Incucyte® 小鼠 IgG2a Fabfluor-pH 红色抗体标记试剂 

1 瓶 (50 µg)

4750

Incucyte® 小鼠 IgG2b Fabfluor-pH 红色抗体标记试剂

1 瓶 (50 µg)

4751

Incucyte® 人 Fabfluor-pH 橙色抗体标记试剂

1 瓶 (50 µg)

4812

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资源

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应用指南

使用 Incucyte® Fabfluor-pH 抗体标记染料进行实时 96 孔抗体内化分析

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海报:AACR 2018

用于抗癌药物发现的抗体内化分析

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产品指南:Incucyte® Fabfluor-pH 抗体标记试剂

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