活细胞免疫细胞化学

使用全新的免疫细胞化学方法揭示表面蛋白表达的动力学机制

免疫细胞化学 (ICC) 是一种重要的细胞成像技术,主要用于蛋白质定位、运输路径和蛋白质间相互作用的可视化。借助专用显微镜,研究人员可以实现以纳米级的分辨率解析标记细胞的结构。

然而,研究蛋白质分布和表达随时间的变化(可能会在细胞分化、细胞相互作用或对外部刺激作出反应时发生)更具挑战性。

全新的 Incucyte® 活细胞免疫细胞化学蛋白质检测技术,可利用无干扰的 Incucyte® Fabfluor-488 和 Incucyte® Fabfluor-594 抗体标记染料,补充现有的免疫细胞化学方案,开启了表面蛋白质表达动力学的新视角。

White Paper Cover Live-cell Immunocytochemistry

白皮书:活细胞免疫细胞化学

立即下载

应用

Incucyte® 活细胞免疫细胞化学分析简介

Incucyte® 活细胞免疫细胞化学分析方案将自动化成像分析的强大功能与简单易用的抗体标记方法相结合,可在组织培养箱内进行基于图像的表面蛋白表达动力学测定。

活细胞免疫细胞化学分析为长期跟踪和定量细胞表面蛋白标记物提供了强大的解决方案,且随后还可以将标记物与细胞功能和形态相关联,从而更深入地洞察细胞过程。

关键优势

Incucyte® 活细胞分析系统联合 Incucyte® Fabfluor-488 和 Incucyte® Fabfluor-594 抗体标记染料可提供一套完整的解决方案,可长时间定量分析 96 和 384 孔板中细胞表面蛋白表达和分布的动力学变化,助您更快获得有意义的结果。

了解更多信息

定量表面蛋白表达动力学

测定细胞表面蛋白对炎症刺激的动态响应变化,进一步了解肿瘤中免疫细胞信号通路的调节。

图 1. Incucyte® Fabfluor-488 染料荧光的自动分析结果显示,PD-L1 的表达随细胞类型、时间和浓度的增加而增加(右图)。在含有 Incucyte® Fabfluor-488-α-PD-L1 抗体复合物和 Incucyte® Opti-Green 背景抑制剂的情况下,将带有 Incucyte® Nuclight 红色标记 MDA-MB-231(乳腺)或 SKOV-3(卵巢)癌细胞与 IFNγ 共培养。绿色荧光区域的定量结果表明,在 IFNγ 的诱导下,MDA-MB-231 细胞中 PD-L1 的表达呈时间和浓度依赖性增加。时程曲线显示了 MDA-MB-231(高表达)和 SKOV-3(中表达)细胞中 PD-L1 的表达差异。


提高分析效率

快速、一步标记,同时自动采集和分析多达 6 个 96 孔板的图像,有助于更快获得结果。


关联蛋白质表达动力学与细胞形态和功能

轻松地将蛋白质丰度和分布的长期变化与细胞形态和功能的实时变化相关联。

图 2. 将细胞表面标志物、吞噬细胞活力和增殖检测的多重分析和形态学观察应用于分化研究(右图)。在 CD11b、CD14 或 CD40 复合 Incucyte® Fabfluor-488 抗体存在的情况下,将 THP-1 单核细胞暴露于培养基(未分化)、维生素 D3 或 PMA 中。与培养基单独处理或维生素 D3 处理的细胞相比,PMA 处理后细胞形态显示出明显的变化(高清相差图片)。动态图突出显示了不同处理条件下,细胞表面蛋白表达的差异性和时间依赖性。有趣的是,在检测 Incucyte® pHrodo® 红色细胞标记试剂盒标记的 Jurkat 凋亡细胞的胞葬作用时,PMA 会导致细胞增殖(汇合)减少,同时吞噬能力增加,而培养基或维生素 D3 处理则未出现这种结果。


通过细胞间的相互作用研究深入洞察结果

通过细胞表面蛋白表达标记物观察和定量分析细胞间的相互作用,深入洞察复杂的共培养模型。

图 3. 使用 Incucyte® Fabfluor-488 抗体标记染料观察和定量混合培养物中的免疫相互作用。将带有 Incucyte® Cytolight 红色标记的 A549 肿瘤细胞与 Incucyte® Fabfluor-488-α-CD45 和 Incucyte® Opti-Green 标记的总淋巴细胞群的预活化或未活化的 PBMC 混合。添加 PBMC 后 2 小时采集的图像显示了 CD45+ 细胞(绿色)和 A549 细胞(红色)之间的相互作用。相互作用的定量分析结果(叠加,图像中的黄色 mask)显示,活化的效应细胞与靶细胞的相互作用明显增加,表明细胞参与了对肿瘤细胞的免疫杀伤(如柱状图所示)。

(视频)在免疫细胞杀伤模型中,确认细胞间相互作用随时间的变化。在含有 Incucyte® Fabfluor-488 标记的 CD8 抗体的情况下,将带有 Incucyte® Nuclight 红色标记的 A549 肺癌细胞与人 PBMCs 共培养。CD3/IL-2 对 PBMC 的活化提高了 PBMCs 与肿瘤细胞的相互作用。免疫细胞的 Incucyte® Fabfluor-488-CD8 标记证实了细胞极性,其中 PBMC的 CD8+ 区域看上去与 A549 肿瘤细胞有所接触。

验证数据

验证无干扰、特异性的长效标记试剂

Incucyte® Fabfluor-488 染料具有无干扰的特性,可产生长期特异性标记,支持对活细胞进行长达数小时或数天的有效表面蛋白动力学分析。

图 4. 使用 Incucyte® Fabfluor-594 染料,结合 Incucyte® Surface Fit 背景扣除和 Incucyte® Cell-by-Cell 分析,观察和定量表面标志物随时间的表达。在 Incucyte® Fabfluor-594 标记的 α-CD71 存在的情况下培养的 HT-1080 细胞显示红色荧光,而使用 Incucyte® Fabfluor-594 IgG 同型对照培养的细胞不显示细胞荧光。添加 Incucyte® Opti-Green 或 Incucyte® Fabfluor-594 标记抗体在 2 天内对细胞生长没有影响 (A)。只有经标记的 CD71 处理后的细胞显示出红色对象的面积随时间而增加 (B),当针对细胞区域进行归一化处理时,结果显示 CD71 的表达恒定 (C)。

特异性抗原检测对混合细胞群进行识别和定量分析

使用可识别蛋白表达随时间变化的特定表面标记评估复杂的共培养模型,表征细胞间的相互作用。

图 5. Incucyte® Fabfluor-488 染料显示出表面标志物表达随时间变化的特异性和持久性。Ramos(B 细胞样)细胞在多种 Incucyte® Fabfluor-488 标记抗体和 Incucyte® Opti-Green 存在的环境下生长。从图中可以观察到非特异性 (CD45) 和特异性 (CD20) B 细胞标记物的长期标记。T 细胞标记 (CD3) 或同型对照抗体则未观察到荧光信号。 当 Ramos 和 Jurkat(T 细胞样)细胞以固定比例混合时,可检测到预期水平的 CD20 染色,证明了 CD20 在混合培养中的作用。

订购信息

订购信息

产品

数量

产品目录号

Incucyte® 小鼠 IgG1 Fabfluor-488 抗体标记试剂盒

1 瓶 (50 µg)

4745

Incucyte® 小鼠 IgG2a Fabfluor-488 抗体标记试剂盒

1 瓶 (50 µg)

4743

Incucyte® 小鼠 IgG2b Fabfluor-488 抗体标记试剂盒

1 瓶 (50 µg)

4744

Incucyte® 小鼠 IgG1 Fabfluor-594 抗体标记染料

1 瓶 (50 µg)

4844

Incucyte® 小鼠 IgG2a Fabfluor-594 抗体标记染料

1 瓶 (50 µg) 

4863


询价

资源

icon-article

产品指南

Incucyte® Fabfluor-488 抗体标记染料

立即下载
icon-article

产品指南

Incucyte® Fabfluor-594 抗体标记染料

立即下载
icon-download

海报:AAI 2018

使用荧光 Fab/Ab 追踪活细胞表面标记和细胞群

立即下载

联系我们

联系我们