概述

中性粒细胞胞外诱捕网的实时定量分析

中性粒细胞处于感染部位的第一道防线,在先天免疫系统中发挥着重要作用,中性粒细胞可采用多种策略来降解和杀死微生物,其中包括释放中性粒细胞胞外诱捕网 (NET)。NET 是一种由抗微生物蛋白和 DNA 组成的网状结构,通过一种独特的中性粒细胞程序性死亡形式释放,该过程称为 NETosis。NET 是一种宿主防御的策略,捕获然后降解病原体,但 NET 也与多种自身免疫性疾病(包括类风湿性关节炎)和病理状态相关。

我们的策略

使用 Incucyte® 活细胞成像系统和 Incucyte® Cytotox 绿色试剂实时自动定量分析执行 NETosis 过程的中性粒细胞。使用 Incucyte® 活细胞试剂分析观察和评估 NETosis 过程中细胞核的膨胀和解聚阶段,以及之后的 NET 释放过程。

NETosis 分析

Incucyte® NETosis 分析简介

Incucyte® NETosis 分析可提供一种综合性解决方案,可在组织培养箱内实时自动观察和定量分析 NETosis,支持 96 孔规格。

使用 Incucyte® 活细胞 NETosis 分析方案进行 NETosis 分析。实时监测使用 PMA 处理的人源中性粒细胞的 NETosis 过程(左边视频)。将进行 NETosis 的中性粒细胞用即混即读的 Incucyte® Cytotox 绿色试剂标记为绿色,并使用 Incucyte® 活细胞分析系统进行实时定量分析。

关键优势

使用延时成像技术验证 NETosis

Incucyte® 活细胞分析系统可验证与 NETosis 相关的独特形态变化,实时跟踪多叶细胞核的丢失、核解聚和细胞膜破坏。

使用 Incucyte® 高清图像验证 NETosis。 在 Incucyte® Cytotox 绿色试剂存在的情况下,使用 PMA 刺激 DMSO (1.25% v/v) 和 ATRA (0.1 µM) 诱导分化的 HL-60 细胞获得 Incucyte® 图像。注意刺激后 2 小时左右会出现细胞核特征性解聚。随着细胞质与核质的混合,细胞核在相位图像中不再可见。细胞核内容物转移到质膜上并释放出来,外部 DNA 与 Incucyte® Cytotox 绿色试剂结合,可观察到荧光增强(绿色)。

使用 Incucyte® Cytotox 绿色试剂在整个时间进程中进行自动分析

确定处理效果如何以及何时发生作用,无需将细胞从培养箱的稳定环境中取出,非常适合用于敏感细胞的分析。

自动、非侵入性地定量处理效果。Incucyte® NETosis 分析可对 96 孔板的每个孔进行自动成像和分析,提供中性粒细胞随时间变化的生理动力学读数(左图)。使用带有面积过滤器的集成式 Incucyte® 基础分析仪软件(右图,排除小于 300 µm2 的对象)能够区分细胞凋亡(经 CMP 处理的较小标记细胞,只有细胞核因失活而发出荧光)和 NETosis(经 PMA 处理,核内容物转移到质膜上并释放出来,外部 DNA 被标记)的诱导处理。

简单的即混即读 96 孔板方案,适用于药理学筛选;无需细胞清洗、固定和分离操作

采用即混即读的 Incucyte® Cytotox 绿色试剂,在细胞外 DNA 释放和荧光增强时快速可视化并定量分析 NETosis。

使用 Incucyte® Cytotox 绿色试剂在整个时间进程中进行自动分析

揭示浓度依赖性响应并进行药理分析。使用浓度递增的 NADPH 氧化酶抑制剂二苯基氯化碘盐 (DPI) 处理 dHL-60 细胞, 然后用 PMA 刺激细胞,并采用简单的即混即读方案,通过 Incucyte® Cytotox 绿色试剂标记细胞。时程图显示在 100 nM 浓度 PMA 的刺激下,绿色对象的总面积随时间的推移而增加,并随着 DPI (A) 浓度的增加而受到抑制;Incucyte® 采集的孔板视图显示出清晰的阳性和阴性对照反应(H 行),每种抑制剂的处理均表现出浓度依赖性反应(每种抑制剂,每种浓度 n = 3)(B);曲线下面积分析可以清晰地显示出浓度依赖性反应 (C)。

联合细胞凋亡的多重分析深入洞察机制

将 Incucyte® Annexin V 红色染料和 Incucyte® Cytotox 绿色试剂相结合进行多重测定,可轻松区分细胞凋亡和 NETosis

结合磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻的 NETosis 多重测定。使用 Incucyte® Cytotox 绿色试剂(NETosis - 高荧光,对象区域大)或 Incucyte® Annexin V 红色染料(PS 外翻 - 低荧光)标记经 PMA 或离子霉素刺激的细胞,检测不同类型的中性粒细胞死亡。

订购信息

Incucyte® Cytotox 绿色试剂和 Annexin V 红色染料经过充分验证,可用于 Incucyte® 活细胞分析系统,并可在同一孔内与 NETosis 和细胞凋亡的联合进行多重检测。

产品

数量

产品目录号

用于死亡细胞计数的 Incucyte® Cytotox 绿色试剂

5 uL x 5

4633

用于细胞凋亡的 Incucyte® Annexin V 红色染料

100 次检测

4641


技术资源

方案 - Incucyte® NETosis 分析

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产品手册 - 用于免疫学研究的分析

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海报 - 中性粒细胞胞外诱捕网的实时可视化和定量分析

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使用高通量实时成像技术定量 NETosis 以及区分人中性粒细胞的细胞死亡机制。

使用高通量实时成像技术定量 NETosis 以及区分人中性粒细胞的细胞死亡机制。 Gupta S, Chan DW, Zaal KJ, Kaplan MJ. J Immunol, 200: 869-879, 2017

“Incucyte® 是创新的实时分析平台,能够以快速、自动化和可重现的方式定量分析 NETosis,大幅优化了中性粒细胞的研究。该平台是评估中性粒细胞生理学和 NETosis,以及快速开发和测试新型中性粒细胞靶标的强大工具。”

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