亲和层析

亲和层析用于通过层析配体与目标分子之间的特异相互作用来捕获分子。这样可在单个工艺步骤中将主要污染物去除至较低浓度。亲和层析常用于蛋白质和疫苗的下游纯化。赛多利斯为此提供多种树脂和膜选择。

为您的亲和层析工艺寻求合适的解决方案

HyperD® 和 Blue Trisacryl®​  亲和树脂设计用于捕获细胞培养上清液和细菌裂解液中的蛋白质。

特性

肝素HyperD 

赖氨酸HyperD 

蓝色Trisacryl 

粒径

80 µm 

70 µm 

40 – 80 µm 

动态结合能力 (10 % BT)

> 25 UI/mL 

> 10 mg/mL 

工作pH

3 – 13 

3 - 13 

4 - 10 

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赛多利斯提供研究和工艺开发用亲和层析膜。这些膜吸附剂采用即用型设计,可节省您的时间。采用一次性层析色谱,免去了包装、清洁和重新验证步骤。

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制备型和分析型整体柱

正确的色谱工具用于正确的任务——以及使用它们的技能。

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亲和树脂

肝素 HyperD®

肝素 HyperD® M 树脂适用于肝素结合蛋白的纯化,如凝血因子、生长激素、脂蛋白和DNA/RNA加工酶。 

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引言

肝素 HyperD® M 复合层析树脂是一种亲和制备树脂,用于与肝素结合的生物分子的纯化,如凝血因子、生长因子、脂蛋白…该树脂在高流速下具有较高的结合能力。选择肝素HyperD M独特的复合结构,是为了在较高线性速度下具有优越的动态结合能力。


肝素HyperD“壳内凝胶”树脂由一个多孔的刚性矿物颗粒组成,其孔内填充有肝素结合的水凝胶。肝素HyperD M的平均粒径为80µM,用于制备规模的ATIII纯化。该吸附剂可以填充在从毫升到超过百升体积的层析柱内,并可高流速、低反向压力下工作。由于肝素分子与树脂之间具有稳定的化学连接,可最大程度地减少肝素的流失。

肝素HyperD M是一种即用型实验室包,悬浮在含有20%乙醇作为抑菌剂的1 M氯化钠溶液中。也可根据要求提供更大的批量。


特点和优势

  • 高线性流速下的高动态结合能力
  • 大规模抗凝血酶III (AT III)纯化的参考方法
  • 实验室规模到生产规模的各种蛋白质的纯化

肝素HyperD® M 亲和树脂的应用

肝素是一种具有抗凝和净化作用的粘多糖,由等摩尔量的葡萄糖胺和葡萄糖醛酸组成,由α-1,4糖苷键交替连接。

一定数量的羟基,尤其是氨基葡萄糖C-6上的羟基,被硫酸酯化。其他基团也被硫酸化,包括葡萄糖胺的C-3和葡萄糖醛酸的C-2。肝素的主要特点是其含有大量的氨基和硫酸基,而硫酸基在酸性介质中极不稳定。


肝素分子含有少量的其他糖(如半乳糖和木糖)以及氨基酸。由于其组成和生物化学作用,肝素具有与许多蛋白质、酶结合的特性,通常与多阳离子有机化合物结合。肝素还能与生物碱、抗生素、染色剂和激素结合。


主要应用包括:

  • 大规模抗凝血酶III (AT III)纯化的参考方法
  • 其他凝血因子,如凝血因子IX、VII、XI、XII和XIIa
  • 脂蛋白脂肪酶纯化
  • 脂蛋白(LDL, VLDL, VLDL脱辅基蛋白, HDL)
  • 生长激素
  • 生长因子:FGF (成纤维细胞生长因子), ECGF
  • DNA和RNA相关酶
  • 各种其他酶(胶原酶、α-L-尿苷酶、透明质酸酶和溶菌酶)、纤维连接蛋白、纤维连接蛋白片段和激素受体的纯化

肝素 HyperD® M亲和树脂的主要特性

粒径

80 µm (av.)

hu ATIII的动态结合能力(600 cm/h)

> 25 UI/mL

配体猪肝素
建议工作pH范围

3 – 13

体积因pH和离子强度变化而变化不可压缩
耐压性

70 bar (1,000 psi)

*采用72.5 UI/mL hu ATIII的20 mM Tris-HCl、0.3 M NaCl溶液(pH 7.4)测定的结合能力采用20 mM Tris-HCl、2 M NaCl溶液(pH 7.4)以600 cm/h、10 cm床高洗脱, 10 cm bed height

化学和机械稳定性

酸碱稳定性与游离可溶性肝素相同:在3到13之间。离解剂和洗涤剂通常对肝素树脂没有影响。肝素HyperD®M可用浓度为0.01至0.1 M的氢氧化钠清洗。

不可压缩的HyperD基质可以承受非常高的流速,而不存在床层坍塌的风险。因此,肝素HyperD M节省了用户时间并保留了纯化后蛋白的生物学完整性。肝素HyperD M树脂的力学性能在很宽的流速范围内保持不变。即使在高线性速度下,最小的压降也能确保生产规模直接可预测地扩大到任何体积。


结合能力

肝素HyperD M即使在高线性速度下也能维持较高的结合能力。其通常被用于药品级ATIII的大规模生产。生产规模的层析柱(>100L)可以在高线性速度(>200cm/h)下工作,同时在最小的反向压力下保持结合能力。即使在10cm床高、600cm/h的高流速下,其对ATIII的结合能力也高于25UI/mL。


验证

用于生产肝素HyperD M的肝素来自北美,原料是猪肠粘膜。肝素的生产符合FDA的GLP和GMP法规的适用要求。
可向工业客户提供验证文件,以支持生产临床和经批准治疗药物的法规要求。

肝素HyperD®  亲和树脂

说明

部件号

25 mL

20029-039 
100 mL 20029-021 

1 L

20029-013

10 L

20029-054

数据表: Heparin HyperD® M 亲和层析

PDF | 363.7 KB

赖氨酸HyperD®

赖氨酸HyperD®亲和树脂用于赖氨酸结合蛋白(如纤溶酶原)的纯化。其在高流速下具有高动态结合能力。

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引言

赖氨酸HyperD® 树脂是一种高速、高结合载量的亲和制备树脂,用于与赖氨酸结合的生物分子的纯化,如人或动物血浆中的纤溶酶原。该树脂在高流速下具有较高的结合能力。


特点和优势

  • 高动态结合能力
  • 刚性树脂具有高流速

赖氨酸HyperD®​ 亲和树脂的主要特性

粒径

70 µm (av.)

配体

L-赖氨酸

建议工作pH范围

3 – 13

体积因pH和离子强度变化而变化不可压缩
耐压性

70 bar (1,000 psi)


赖氨酸HyperD®亲和树脂采用一种在刚性微珠大孔内聚合的高容量水凝胶。

这种设计结合了理想的柔软、高容量凝胶特性与刚性微珠的尺寸稳定性。

动态结合力实际上与线性流速无关。这种组合的结果是获得了高生产率。由于微珠密度高,树脂填充速度快。

赖氨酸 HyperD® 亲和树脂

说明

部件号

25 mL

20059-036

100 mL

20059-028

Blue Trisacryl®

Blue Trisacryl® M 是一种亲和树脂,用于酶、干扰素和一些凝血因子的纯化以及白蛋白的去除。该树脂采用载有蓝色染料配体的三丙烯酸酯发泡颗粒。 

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引言

Blue Trisacryl® M 染料亲和层析树脂用于多种酶和蛋白质的纯化,如激酶、干扰素和某些凝血因子。它也用于蛋白质组学研究样品中的白蛋白纯化或白蛋白去除。

Blue Trisacryl® M 树脂以大孔非离子合成聚合物Trisacryl为基础,而蓝色染料通过稳定的六碳间隔臂作用固定在聚合物上,以防止染料在正常工作条件下流失。


特点和优势

  • 独特的多模式相互作用机制
  • 染料和吸附剂的牢固结合防止了染料的流失
  • 实验室到生产规模的多种应用


使用和储存

Blue Trisacryl® M 吸附剂是一种即用型实验室包,悬浮在含有20%乙醇(v/v)作为抑菌剂的1 M氯化钠溶液中,或者装在桶中用于工艺规模。

Blue Trisacryl® M 树脂可用于许多蛋白质的纯化

Blue Trisacryl® M 树脂是一种基团特异性吸附剂,对多种酶具有亲和力。由于与核苷酸辅助因子(ADP,NADP)的结构相似,一些蛋白质与染料的相互作用具有生物特异性。其他蛋白质(如白蛋白或干扰素)通过疏水、静电和π-π键相互作用结合。

应用包括 :

  • 需要NAD作为辅助因子的酶(激酶、脱氢酶、磷酸酶…)
  • 其他酶(硫酸酯酶、RNA聚合酶、单加氧酶、氧化还原酶)
  • 血浆蛋白
  • 从血浆转移
  • _α1-酸性糖蛋白、α-胎儿蛋白、α1-蛋白酶抑制剂 
  • 丝氨酸蛋白酶
  • 干扰素
  • DNA抗体
  • 重组疫苗纯化工艺

Blue Trisacryl® M 树脂的主要特性

粒径

40 – 80 μm

配体蓝色染料


分子量上限107 Da
人白蛋白结合能力1

≥10 mg/mL

热稳定性2到121 °C
工作pH4至10
清洗pH1到12(短期)
100 cm/hr时的工作压力高达3 bar(45 psi)

1 采用5 mg/mL蛋白、16 mm 内径x 6 cm床高柱尺寸、25 cm/hr流速在PBS缓冲液中测定

化学和机械稳定性

Blue Trisacryl® M 树脂的化学稳定性是Trisacryl基质的合成性质和配体偶联机制稳定性增强的作用。该树脂在维持良好流速的同时,可在反向压力高达3bar下工作。

结合能力

Blue Trisacryl® M树脂的结合能力取决于蛋白、原料的组成和如pH等参数。注意,某一特定蛋白的结合能力可能因动物种类而异(例如,牛白蛋白的结合能力低于人白蛋白)。

Blue Trisacryl® M 树脂 

说明

部件号

25 mL

25896-045

100 mL

25896-010

1 L

25896-028

5 L

25896-044

10 L

25896-036

Data Sheet: Blue Trisacryl® M Affinity Chromatography Resin

PDF | 424.1 KB
亲和膜

Sartobind® SC

高通量膜吸附剂有许多优点,如减少时间和缓冲液。该膜是捕获宿主细胞蛋白质等杂质和DNA的理想选择,已有纳米尺寸的膜,非常适合替换工艺开发和研究用层析柱。  

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