采用无支架模型对实体瘤进行建模
肿瘤球或肿瘤细胞聚集体比单层细胞更能代表在体内条件下，生长为肿瘤球的肿瘤细胞会表现出一些生理特征，包括相关的形态、更高的细胞存活率以及缺氧核心。
越来越多证据表明，与 2D 单层细胞模型相比，肿瘤球模型可进行更相关和更多的转化性观察，特别是在癌症生物学和肝毒性领域。尽管研究证实 3D 肿瘤细胞培养能够比简单的 2D 单层细胞更接近于癌症的生理环境，但目前可用的大多数 3D 肿瘤球形成和定量技术通常费时费力、价格高昂和/或可重现性较低。 在圆底 ULA 板中制备单肿瘤球模型是一种简单经济的实体瘤模型建立方式。
应用
Incucyte® 3D 单肿瘤球分析
要有效分析基于液体的 3D 单肿瘤球可能颇具挑战。传统的酶标仪分析缺少基于图像的多方面分析，包括分析形态信息和确认图像中数据的功能。由于多种因素，传统的成像系统本身就难以适应体外培养模型的动力学分析，主要原因如下：
- 数据不完整 -成像间隔之间的信息缺失
- 多种不受控制的环境波动 -细胞在培养箱和成像系统之间来回转移，同时培养箱外冗长的 3D 图像采集方案会造成温度差异，且无法控制氧气和二氧化碳浓度
- 理想的图像采集参数开发非常耗时
- 图像处理复杂，需要专家级操作人员生成定量信息
Incucyte® 3D 单肿瘤球分析方案可提供集成式的完整解决方案，在组织培养箱内实时自动追踪和定量肿瘤球的形成、生长和健康状态。
视频：利用 Incucyte® 活细胞分析系统和 Incucyte® Cytotox 绿色染料持续监测肿瘤球的生长和细胞毒性。将无标记 SK-OV-3 人卵巢腺癌细胞（使用或不使用 1µM 喜树碱处理）进行 10 天的明场和绿色荧光成像。
关键优势
Incucyte® 3D 单肿瘤球分析的关键优势
- 获得更多生理相关信息 - 在培养箱中定量无标记生长，研究 3D 肿瘤球培养物的形态。
- 揭示单一培养或共培养中细胞随时间的变化 - 使用无干扰型试剂实时测定细胞活力和毒性，研究作用机制或免疫调节
- 生成可重现的定量数据 - 通过经实验室测试的方案、高质量图像和客观分析获得适用于药理学分析的可靠数据
- 提高分析效率 - 可同时自动采集、分析和绘制多达六个 96/384 孔板的数千张图像，更快地获得结果
获得更多生理相关信息
图 1. 监测肿瘤球大小随时间的变化，监测时，肿瘤球的生长在组织培养箱内不受干扰。
明场图像显示了 MDA-MB-231 乳腺癌肿瘤球 ± 细胞毒素剂喜树碱 (1 µM) 的生长情况。 经溶媒处理的肿瘤球体积增加，而经 CMP 处理的肿瘤球保持原有的密度。 每 6 h 自动采集一次图像，用于明场区域的定量分析。
图 2. 高质量 HD 相位图和 DF 明场图像显示肿瘤球形态。A549 和 MDA-MB-231 细胞接种后 72 小时形成的肿瘤球高质量 HD 相位图和对应的 DF 明场图像。从图中可轻松地区分疏松的聚集体和致密的肿瘤球形态，如图中 A549 和 MDA-MB-231 细胞所示例。MDA-MB-231 聚集物在离心后加入 2.5% v/v Matrigel®，可密集化形成肿瘤球。所有图像经 10 倍放大后采集。
揭示单一培养或共培养中细胞随时间的变化
图 3.确定细胞毒性和细胞抑制的作用机制。 利用 Incucyte® Cytotox 绿色染料比较明场和荧光读数。图像中显示了处理 10 天后，SK-OV-3 肿瘤球明场 mask 区域中的绿色荧光。 明场区域的时程曲线显示了两种药物处理后类似的响应 - 随着药物浓度的增加，肿瘤球的生长受到抑制。 明场边界内的平均绿色强度（底部行）显示了肿瘤球对细胞毒性（喜树碱，左）和细胞抑制性（环己酰亚胺）试剂的响应差异。 在喜树碱存在的情况下，细胞死亡，导致细胞毒性报告试剂（Incucyte® Cytotox 绿色染料）产生的荧光强度增加；而经环己酰亚胺和溶媒处理的肿瘤球只显示出少量细胞死亡，与预期一致。
图 4. 在 Incucyte® 活细胞分析系统中持续监测肿瘤球的生长和细胞健康状态。SK-OV-3 人卵巢癌细胞稳定表达核限制性荧光蛋白（Incucyte® Nuclight 红色慢病毒试剂）。细胞毒性药物喜树碱 (1 µM) 抑制了荧光随时间的增加（在明场 mask 定义的肿瘤球区域内测定）。
图 5.（视频）.在 3D 细胞培养模型中定量分析抗体依赖性细胞介导的细胞毒性 (ADCC)。在肿瘤球模型中，曲妥珠单抗（Herceptin®，赫赛汀®）诱导 SK-OV-3 卵巢癌细胞的免疫细胞杀伤。将带有 Incucyte® Nuclight 红色标记的 HER2 阳性 SKOV-3 肿瘤球与 PBMC 共同接种，并使用赫赛汀（靶向 HER2 受体的 mAb）处理。赫赛汀可诱导 SKOV-3 肿瘤球的生长抑制。
图 7. 肿瘤球培养显示出分析的稳定性和可重现性。Incucyte® VesselView 展示了 4 个细胞密度下 3 种肿瘤球类型（肺癌、纤维肉瘤、卵巢癌）的明场区域 mask。明场区域图显示，这些细胞类型以建议的密度（2500 个细胞/孔）接种可产生稳定的时程曲线。
图 8.在生理相关条件下进行稳定的药理学分析。在组织培养箱中进行无标记肿瘤球分析，检测喜树碱 (CMP)、顺铂 (CIS) 和奥沙利铂 (OXA) 对 SKOV-3 细胞生长的影响。SKOV-3 细胞以 5000 个细胞/孔的密度接种，等待肿瘤球形成（72 小时），然后采用一系列稀释的化合物处理细胞，获得肿瘤球生长的动力学参数。微孔板图表展示了单个孔随时间的最大明场 (BF) 面积 (µm2)。浓度响应曲线显示了处理 240小时后的最大 BF 面积 (µm2)。数据收集时间为 240 小时，每间隔 6 小时采集一次图像。每个数据点代表平均值 ± SEM，n = 8。
提高分析效率
图 9. 向导式界面，即使初次使用的用户也能够轻松操作。 自动图像采集和分析工具可为您带来“轻松设置，自动化处理”的体验。支持远程查看图像，监测实验进程，实时分析，快速作出决策。
订购信息
订购信息
产品 | 数量 | 产品目录号 |
|---|---|---|
Incucyte® 肿瘤球分析软件模块 | 1 | 9600-0019 |
Incucyte® Cytotox 绿色染料 | 1 | 4633 |
Incucyte® Cytotox 红色染料 | 1 | 4632 |
Incucyte® Annexin V 红色染料 | 1 | 4641 |
Incucyte® Annexin V 绿色染料 | 1 | 4642 |
Incucyte® Nuclight 绿色慢病毒试剂（EF-1a 启动子、Puro 筛选） | 1 | 4624 |
Incucyte® Nuclight 红色慢病毒试剂（EF-1a 启动子，Puro 筛选） | 1 | 4625 |
Incucyte® Cytolight 绿色慢病毒试剂（EF-1a 启动子、Puro 筛选） | 1 | 4481 |
Incucyte® Cytolight 红色慢病毒试剂（EF-1a 启动子，Puro 筛选） | 1 | 4482 |
