什么是抗体内化？

使用 Incucyte^® Fabfluor-pH 抗体标记试剂和自动化分析工具可轻松地可视化并检测抗体内化随时间的变化。

将 HT1080 细胞用 Incucyte^® Fabfluor-pH 标记的 α-CD71 或 IgG1 同型对照 (4 µg/mL) 进行处理，在 12 小时内每 30 分钟采集一次 HD 相和红色荧光图像，所用放大倍数为 10 倍。经 Fabfluor-α-CD71 处理的细胞图像在细胞质中显示出红色荧光 (A)。经标记的同型对照处理的细胞不显示荧光 (B)。自动生成随时间推移的红色对象区域，显示在经标记的 α-CD71 处理的细胞中迅速增加，而经同型对照处理后的细胞中则没有信号 (C)。所示图像在处理后 6 小时采集得到，显示的数据为 3 个孔的平均值 ± SEM。

区分由细胞表面抗原表达驱动的多种细胞类型的内化响应的差异。

将 Jurkat（T 细胞样）和 Raji（B 细胞样）细胞（30,000 个细胞/孔）用各种 Incucyte^® Fabfluor-pH 标记的抗体 (4 µg/mL) 处理以显示特定的性质。使用 20 倍物镜在 12 小时内每 30 分钟采集一次高清相位和红色荧光图像。时程数据（A 和 B）表明，两种细胞系中的响应特征与所测试的标记的预期表达谱相匹配，并且证实内化响应仅在表达特定抗原时才会出现。请注意，该分析方法可以区分 Raji 细胞相比于 Jurkat 细胞的响应差异（α-CD71 的响应曲线更陡峭，因此内化速率更快）。曲线下面积 (AUC) 分析展示了两种细胞系的总体特征 (C)。显示的所有数据均为至少 4 个孔的平均值 ± SEM，所示时程数据为归一化的红色区域。

揭示浓度依赖性响应并进行药理分析。

使用简单的即混即读方案，用浓度不断增加的 Fabfluor-pH 标记的赫赛汀处理 BT-474 Her2 阳性细胞。时程图显示，随着赫赛汀浓度的增加，归一化的红色区域随时间推移不断增加 (A)；该响应的曲线下面积分析表现出明显的浓度依赖性响应，EC50 为 323 ng/mL (B)。显示的所有数据均为 3 个孔的平均值 ± SEM，所示时程数据为归一化的红色区域。