概述
使用 Incucyte® Cell-by-Cell 分析解答有关贴壁或非贴壁细胞模型的更多问题
即使最简单的细胞系统也存在很大的异质性。借助 Incucyte® S3 和 Cell-by-Cell 分析模块,您可以在培养箱中实时定量活细胞的细胞异质过程及其带来的影响,使用我们独特便捷的活细胞成像和分析方法,研究细胞亚群在活化或分化过程中的动力学、表型变化,或了解细胞亚群对治疗的响应。
Incucyte® S3 活细胞分析系统、Cell-by-Cell 分析软件模块和 Incucyte® 试剂提供了全新的端到端解决方案,可在 96 孔板中进行异质性细胞培养的高通量分析。
主要功能和优势
功能 | 优势 |
借助先进的软件算法,识别高对比度相差图像中的单个贴壁或非贴壁细胞 | 实现对总细胞群的无标记定量 |
使用我们专用的向导式软件工作流程,基于形态或荧光对细胞进行分类 | 将细胞亚群表型与功能或健康状况轻松联系起来,为研究工具(例如单细胞基因组学分析)提供补充性功能数据 |
专有的无干扰试剂,可检测细胞表面标志物的表达、功能或健康状况 | 能够对活细胞进行多重动力学分析 |
细胞保持固定,而我们独特的移动光学系统则能够移动光学元件,以便观察视野内特定区域的细胞群动态变化 | 在图像采集过程中,细胞保持在视野内 |
由您的组织培养箱提供不间断培养 | 在整个实验过程中,通过一致的生理相关环境减少伪影 |
自动化图像采集和分析,能够在 96 孔规格下生成大量数据 | 实现稳定的药理学分析。筛选候选治疗药物,或在更短的时间内研究更多变量 |
完整的端到端解决方案,包括仪器、软件和试剂 | 缩短故障排除所用的时间,从而投入更多时间进行研究 |
Cell-By-Cell
Cell-by-Cell 分析方案简介
动态了解细胞亚群的生物学表型
将 Incucyte® Cell-by-Cell 分析方案应用于异质性细胞群(例如 PBMC、免疫或肿瘤制剂),以研究单个细胞亚群的动态行为,然后通过将数据与疾病状态、进展和治疗效果相关联来获得深入的了解。动态观察分化或活化过程以了解亚群随时间的调控和转变,并确定对混合细胞群体特定细胞类型的治疗机制。
关键优势
研究细胞亚群的动态变化并与活化或分化等过程结合
在不受干扰的微环境中定量分析混合培养物中表达的标志物或形态的细胞特异性表型变化
图 2. 分析活化 T 细胞亚群:CD71 上调。(A-C) Cell-by-Cell 密度图显示 CD71(经 FabFluor-488 标记)荧光在活化 T 细胞中随时间和细胞面积(相)的增加而增加。 (D) 活化后 CD71+ 细胞(而非 CD4+ 细胞)比例的动态变化。(E) 亚群分析显示,与小细胞 (< 110 mm2) 相比,大细胞 (> 100 mm2) 中的 CD71 表达优先上调。这些数据证明 CD71 表达发生活化诱导的时间依赖性增加,并且细胞大小与 CD71 之间存在强关联,在活化 4 天后,> 90% 的大细胞表达 CD71。
使用动力学表型鉴别混合培养物中的亚群
测量用目标细胞表面蛋白标记的细胞数量的分数变化。
动态了解药物诱导的治疗对增殖的影响
基于细胞周期阶段或细胞健康的亚群研究揭示药物作用机制
图 5. 生成适用于药理学研究的稳定的细胞周期阶段数据。在顺铂或 5-氟尿嘧啶 (5FU) 处理后,对表达 Incucyte® 细胞周期红色/绿色慢病毒试剂 (INSERT LINK) 的 HT1080 纤维肉瘤细胞中的细胞周期阶段分布进行定量。第 24 h 时的响应显示于细胞图像中(轮廓示出由 Incucyte® Cell-by-Cell 分析软件鉴别出的单个细胞)(A)。经顺铂处理后,处于 G1 期(绿色荧光)的细胞百分比以浓度和时间依赖性方式降低 (B),处于 S/G2/M 期(红色荧光)的细胞百分比则以浓度和时间依赖性方式增加 (C),与其已知的干扰有丝分裂的作用机制一致。经 5FU 处理后,处于 G1 期的细胞百分比增加 (E),处于 S/G2/M 期的细胞百分比降低 (F),与 5FU 对 DNA 合成的已知影响一致。浓度响应曲线(D 和 G)显示出第 24 h 时化合物对细胞周期的所有可检测阶段的影响。
图 6. 追踪细胞亚群中的细胞健康:经喜树碱(CPT,细胞毒性化合物)或环己酰胺(CHX,细胞抑制化合物)处理后,HT1080 纤维肉瘤细胞凋亡的时程。利用 Incucyte® Nuclight 红色试剂(细胞核活力标记物)和无干扰 Incucyte® Caspase 3/7 绿色试剂(细胞凋亡指示剂)的多重读数确定细胞健康状况。细胞图像显示出第 24 h 时的响应,并带有相关的分类遮蔽(A 和 E)。使用 Incucyte® Cell-by-Cell 分析软件工具,基于红色和绿色荧光对细胞亚群进行分类(B 和 F)。经 CPT 处理后,红色细胞群减少,指示活细胞损失;红色和绿色荧光增加,指示早期凋亡;且绿色荧光增加,指示晚期凋亡 (C)。经 CHX 处理后,未发生细胞凋亡 (G)。显示了早期凋亡细胞群的浓度响应时程(全部细胞中表现出红色和绿色荧光的细胞百分比,D 和 H)。显示的值为 3 个孔的平均值 ± SEM。
补充现有工作流程
将自动化图像采集和专门打造的 Cell-by-Cell 图像分析工具的强大功能与独特的活细胞成像试剂相结合,可由数千张图像轻松生成动力学数据。研究由已鉴别细胞亚群得到的功能动力学数据,并与总细胞群数据进行比较。
工作流程显示了使用 Incucyte®️ Cell-by-Cell 分析软件模块区分单个细胞并使用标记细胞的面积、离心率或荧光强度对细胞亚群进行分类所采取的典型步骤。使用 Incucyte® Annexin V NIR 染料检测在化合物处理情况下随时间推移的死亡细胞总数。通过高级无标记分类分析软件模块,可实现利用总细胞形态的附加功能。
比较
与传统技术的比较
Incucyte® 活细胞分析系统和 Cell-by-Cell 分析软件模块可深入洞察结果,提高分析效率,补充了现有单细胞分析技术的短板:
Incucyte® Cell-by-Cell | 流式细胞仪 | 高内涵成像 | 延时显微镜 | |
生物学信息 | ||||
在单个细胞水平上提取特征 | ||||
细胞群、亚群和异质性分析工具 | 取决于制造商 | |||
活细胞、“无干扰”方案 | (对于某些应用) | |||
长期、全面的环境控制 | ||||
单细胞追踪 | 取决于制造商 | |||
空间/形态学见解 - 图像和视频 | ||||
长时间分析 | ||||
分析效率 | ||||
微孔板通量 | ||||
自动化采集和分析 | 取决于制造商 |
验证数据
验证数据
图 7. 在异质(混合)培养物和 Cell-by-Cell 分析中鉴别出的细胞。使用 FabFluor-488 标记抗体对混合 B 细胞/T 细胞培养物中的 CD 表面标记物 CD45 和 CD20 进行表征。(A) 所示比例的混合细胞群的 Incucyte® Vessel 视图(黄色 = 抗体标记的细胞)。注意与标记两种细胞类型的 CD45 相比,随着 R:J 比率的增加,CD20 标记 (Ramos) 的细胞的比例更大。(B) 混合培养物中表达百分比的 Incucyte® Cell-by-Cell 定量分析。(C) CD20+ 细胞计数时程,显示出混合培养物内 CD20+ 细胞的增殖。显示的值为 4 个孔的平均值 ± SEM。
订购信息
订购信息
产品 | 数量 | 产品目录号 |
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Incucyte® 活细胞分析系统 | 1 台仪器 | 4647 |
Incucyte® Cell-by-Cell 分析软件模块 | 1 个模块 | 9600-0031 |
Incucyte® 高级无标记分类分析软件模块 | 1 个模块 | BA-04867 |
Incucyte® 小鼠 IgG1 Fabfluor-488 抗体标记染料 | 1 瓶 (50 µg) | 4745 |
Incucyte® 小鼠 IgG2a Fabfluor-488 抗体标记染料 | 1 瓶 (50 µg) | 4743 |
Incucyte® 小鼠 IgG2b Fabfluor-488 抗体标记染料 | 1 瓶 (50 µg) | 4744 |
用于细胞凋亡分析的 Incucyte® Annexin V 红色染料 | 1 瓶 | 4641 |
用于细胞凋亡分析的 Incucyte® Annexin V 绿色染料 | 1 瓶 | 4642 |
用于细胞凋亡分析的 Incucyte® Caspase 3/7 绿色染料 | 20 µl | 4440 |
用于细胞凋亡分析的 Incucyte® Caspase 3/7 红色染料 | 20 µl | 4704 |
用于死亡细胞计数的 Incucyte® Cytotox 红色染料 | 5 µl x 5 | 4632 |
用于死亡细胞计数的 Incucyte® Cytotox 绿色染料 | 5 µl x 5 | 4633 |
用于死亡细胞计数的 Incucyte® Cytotox NIR 染料 | 100 µl | 4846 |