肿瘤浸润淋巴细胞：为什么要研究它们？

图 1. 使用 iQue^® 高通量流式细胞仪平台对肿瘤浸润淋巴细胞进行体外分析的方案示意图。

• 定量分析免疫细胞浸润对刺激的反应。
• 了解浸润细胞和非浸润细胞活化特征的表型差异，确定肿瘤微环境的影响。

图 2.(A) 浸润到乳腺癌肿瘤球中的 CD3+ PBMC 呈浓度依赖性增加。

BT474（4,000 个细胞/孔）肿瘤球形成 72 小时后，再添加 PBMC（20,000 个细胞/孔）和 CD3/CD28 Dynabead。使用 CD3/CD28 Dynabead 激活 PBMC 会导致 CD3 T 细胞以浓度依赖性方式浸润到乳腺癌肿瘤球中。微球密度最高 (20K) 时，PBMC 开始杀死肿瘤球，随着肿瘤球受到攻击，浸润减少。每个数据点代表平均值 ± SEM，n = 8。

与非浸润细胞相比，(B) 和 (C) 浸润细胞的活化标志物表达水平更高。 使用 T 细胞活化和细胞因子分析试剂盒 (TCA)  收集和标记非浸润细胞。然后，分离肿瘤球并标记浸润细胞。浸润细胞表达更高水平的 CD69（早期）、CD25（中期）和 HLA-DR（晚期）活化标志物。每个数据点代表平均值 ± SEM，重复测定 8 次。

图 3.T 细胞的肿瘤球浸润具有细胞类型特异性，并受基质细胞调节。

(A) A549、SKOV-3 或 BT474（5,000 个细胞/孔）肿瘤球形成 72 小时后，再添加预活化的 (CD3/CD28 Dynabeads^®) PBMC（25,000 个细胞/孔）。所示数据代表每种癌症有 3 个供体。CD3 浸润取决于癌症类型。(B) CD8:CD4 比值也因癌症类型不同而有所差异，它是反映治疗结果和病理完全反应 (pCR) 可能性的指标。 (C) 将 BT474 单独或按 1:1 比例将其与 CCD1068SK 成纤维细胞混合形成肿瘤球 72 小时后，再接种预活化的 PBMC。纳入成纤维细胞使 CD3+ 细胞的肿瘤球浸润显著减少 (>60%)。

可以同时从多个板采集数据并分析，从而更快地获得结果。

图 4.集成式 iQue Forecyt^® 软件可快速分析数据，缩短数据处理时间。

TCA 试剂盒具有一个预定义设门模板，可通过轻松设置实现自动化处理。可以通过定义阳性（绿色）和阴性（红色）细胞群来调整设门，从而自动更新孔板视图读数。然后，可以按照简单易用的向导将孔板视图转换成浓度响应曲线。

得益于快速采样，重复测定次数得以增加，因此可以减轻高度可变的生物学特征所存在的分析挑战。

图 5.在分离肿瘤球后，使用 iQue^® 高通量流式细胞仪平台对 CD3 细胞浸润进行定量分析，评估重复测定次数的影响。

借助 iQue^® 的高通量性能，用户可以在不延长采集时间的同时增加重复测定次数，从而加快可变生物学效应的研究。

96 孔板：

• 4 次重复测定（每 4 次清洗一次，每 4 次摇晃一次，吸取时间 5 秒）21 分钟 32 秒
• 8 次重复测定（每 8 次清洗一次，每 4 次摇晃一次，吸取时间 5 秒）19 分钟 8 秒