研究免疫细胞杀伤

图 1A. 利用 Incucyte^® 免疫细胞杀伤实验可视化免疫细胞/肿瘤细胞的相互作用。(1) 细胞毒性 T 细胞（较小）和标记的肿瘤细胞（较大，红色）之间的物理接触。T 淋巴细胞分裂。(2) 肿瘤细胞被细胞毒性 T 淋巴细胞攻击：“死亡之吻”。(3) 肿瘤细胞形成胞质颗粒，Caspase 3/7 标记（绿色），核固缩，细胞死亡。(4) 肿瘤细胞有丝分裂：一个细胞分裂为两个。

图 1B. 使用 Incucyte^® Fabfluor-488 可视化并定量分析混合培养物中免疫细胞与肿瘤细胞的相互作用。将带有 Cytolight 红色标记的 A549 肿瘤细胞与 Incucyte^® Fabfluor-488-α-CD45 和 Incucyte^® Opti-Green 标记的总淋巴细胞群的预活化或未活化的 PBMC 混合。添加 PBMC 后 2 小时采集的图像显示了 CD45+ 细胞（绿色）和 A549 细胞（红色）之间的相互作用。相互作用的定量分析结果（叠加，图像中的黄色 mask）显示，活化的效应细胞与靶细胞的相互作用明显增加，表明细胞参与了对肿瘤细胞的免疫杀伤（如柱状图所示）。使用 Incucyte^® Cell-By-Cell 分析软件模块进行分析。

图 2A. 使用 Incucyte^® 免疫细胞杀伤实验进行贴壁肿瘤细胞和效应细胞增殖、死亡和亚群分析。在含有 Incucyte^® Annexin V 橙色染料、Incucyte^® Fabfluor-488-α-CD45 抗体复合物和 Incucyte^® Opti-Green 背景抑制剂的情况下，使用 Incucyte^® Nuclight NIR 慢病毒转染的 A549 细胞与数量增加的活化（顶行）或非活化（底行）的 PBMC 共培养。 定量分析 NIR（蓝色）细胞核显示靶细胞增殖，橙色荧光区域 (Annexin V) 显示靶细胞死亡。使用 Incucyte^® Cell-by-Cell 分析软件模块可在存在肿瘤细胞的情况下定量总效应细胞数，无需标记。添加 Fabfluor-CD45 表明 > 80% 是 CD45 阳性免疫细胞。

图 2B. 使用 Incucyte^® Cell-by-Cell 分析模块测定非贴壁靶细胞和效应细胞增殖、死亡，以及进行亚群分析。在含有 Incucyte^® Annexin V NIR 染料、Incucyte^® Fabfluor-488-α-CD8 抗体复合物和 Incucyte^® Opti-Green 背景抑制剂的情况下，使用 Incucyte^® Nuclight 橙色慢病毒试剂转染的 Ramos 细胞与活化或非活化（使用 CD3/IL2）的 PBMC 共培养。定量分析橙色（红色）细胞核显示靶细胞增殖，NIR（蓝色）荧光区域显示靶细胞死亡。使用 Incucyte^® Cell-by-Cell 分析软件模块可定量分析并绘制总目标细胞数和效应细胞数，以及靶细胞的凋亡指数随时间变化的图表。

图 3A. ADCC: 在免疫细胞杀伤肿瘤球模型中，曲妥珠单抗（Herceptin^®，赫赛汀）诱导免疫细胞杀伤 SKOV-3 卵巢癌细胞：对 HER2 阳性的 Nuclight 红色标记 SKOV-3 球体（2500 个细胞/孔）接种 PBMC（6250 个细胞/孔）并用赫赛汀（靶向 HER2 受体的 mAb）处理，连续拍照 10 天 (A)。通过荧光强度 (B) 评估赫赛汀对 SKOV-3 肿瘤球生长的抑制。

图 3B. ADCC: 曲妥珠单抗（赫赛汀）诱导免疫细胞杀伤 SKOV-3 卵巢癌细胞。PBMC 与 Nuclight 红色标记 SKOV-3（HER2 阳性）或 Nuclight 红色标记 A549（HER2 阴性）肿瘤细胞共培养。在 SKOV-3 (A) 中曲妥珠单抗诱导随时间对肿瘤细胞增殖产生受浓度影响的抑制作用，但对 A549 (B) 细胞没有作用。曲妥珠单抗抑制 SKOV-3 细胞增殖的浓度-响应曲线 (C)。含有和不含抗体（添加后 72 小时）的情况下未处理（顶部）和 masked-image（底部）示例 (D)。