什么是吞噬作用？
吞噬作用是一种特殊形式的内吞作用，细胞以这种方式吞噬和内化固体物质。巨噬细胞、中性粒细胞和未成熟的树突状细胞是免疫系统的主要吞噬细胞，专门参与吞噬过程。吞噬作用是控制、杀伤和处理微生物以进行抗原呈递的重要机制，代表了病原体先天免疫应答的一个重要方面。
应用
Incucyte® 吞噬作用分析简介
简单的即混即读式成像分析，可直接在培养箱内对活细胞的吞噬作用进行实时自动定量分析。该分析采用 pH 敏感性偶联探针，可对生物颗粒的内化进行实时的可视化和分析，非常适用于监测免疫细胞对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌或酵母源性病原体的吞噬作用。
视频：使用 Incucyte® 活细胞分析系统实时监测吞噬作用。使用 Incucyte® 活细胞成像和分析系统采集的延时视频实时显示了小鼠 J774A.1 型巨噬细胞吞噬 Incucyte® pHrodo® 绿色大肠杆菌 Bioparticles® 的过程。pHrodo® Bioparticles® 在被吞噬并进入吞噬体的酸性环境中后，荧光增加。Incucyte® 集成图像分析工具能够在整个分析过程中分析和测定绿色荧光信号，并将背景荧光的影响降至最低。注意巨噬细胞的动态活动，和随着时间推移形成吞噬杯，进行生物颗粒吞噬的过程。
检测原理
- 将巨噬细胞（例如 J774A.1 小鼠巨噬细胞）或其他吞噬细胞接种到 96 或 384 孔板中。
- 添加即混即读的无菌 Incucyte® pHrodo® Bioparticles® 实时监测吞噬作用。
- 细胞荧光增加表明 pHrodo® Bioparticles® 已内化至吞噬体中。Incucyte® 自动图像分析可实现对随时间变化的吞噬作用进行定量分析。
关键优势
Incucyte® 吞噬作用分析的关键优势
- 使用延时成像技术验证吞噬作用
- 自动分析和定量
- 即混即读的 96/384 孔规格 - 无需执行细胞固定、封闭或分离操作
- 高灵敏度、低背景、低细胞数
- Incucyte® 的无菌 pHrodo® Bioparticles® 可支持长期的实时监测（0 到 > 48 小时）
使用延时成像技术验证吞噬作用
图 1. J774A.1 小鼠巨噬细胞吞噬 Incucyte® pHrodo® 绿色大肠杆菌 Bioparticles® 的 4 小时延时可视化视频。图像中证明了细胞质中存在荧光点状（吞噬体）标记的结构，但细胞核中不存在该结构。
自动分析和定量
图 2. 使用荧光分割进行吞噬作用的定量分析。Incucyte® 软件能够准确分割荧光图像（桃红色 mask），并将背景荧光的影响降至最低。
即混即读的 96/384 孔规格 - 无需执行细胞固定、封闭或分离操作
图 3. Incucyte® 吞噬作用分析快速入门指南。
高灵敏度、低背景、低细胞数
响应程度取决于细胞数量和 Bioparticles® 数量。
图 4. 吞噬作用的定量取决于细胞数量和 Bioparticles®。J774A.1 小鼠巨噬细胞吞噬 Incucyte® pHrodo® 绿色金黄葡萄球菌 Bioparticles®（96 孔规格）。注意每孔低至 3 K 细胞时的高信噪比。
图 5. 在没有细胞、Bioparticles® 或抑制剂（细胞松弛素 D）的情况下，产生高度一致的吞噬信号，且几乎没有背景信号。图中显示了 J774A.1 细胞吞噬 Incucyte® pHrodo® 绿色大肠杆菌 Bioparticles® 的时程孔板视图。
图 6.细胞松弛素 D、拉春库林 A、诺考达唑抑制吞噬作用。图中显示了 J774A.1 小鼠巨噬细胞在添加抑制剂的情况下吞噬 Incucyte® pHrodo® 绿色大肠杆菌 Bioparticles® 的结果。
Incucyte® 吞噬作用分析 vs. 其他常见方法
评估吞噬作用的常用方法通常为单点分析（例如高内涵分析 (HCA)），需要细胞分离（例如流式细胞仪）或清洗/淬灭标记病原体（例如荧光素标记）。
Incucyte® 活细胞分析 | 酶标仪 | 流式细胞仪 | HCA | ELISA | |
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实时细胞可视化 |
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集成分析 |
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即混即读，无需清洗或淬灭操作 |
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长期动力学测定 |
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灵活选择效应细胞 |
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无需细胞固定/分离 |
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高灵敏度/低背景信号 |
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低细胞数/生物颗粒数量 |
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订购信息
订购信息
Incucyte® pHrodo® Bioparticles® 经充分验证，可用于 Incucyte® 活细胞分析系统，并经过灭菌处理，可进行吞噬作用的长期监测（0 至 >48 小时）。
产品 | 产品数据表 | 安全性数据表 | 数量 | 产品目录号 |
|---|---|---|---|---|
Incucyte® pHrodo® 红色大肠杆菌 Bioparticles® | 2 mg | 4615 | ||
Incucyte® pHrodo® 绿色大肠杆菌 Bioparticles® | 查看 | 2 mg | 4616 | |
Incucyte® pHrodo® 红色酵母聚糖 Bioparticles® | 查看 | 1 mg | 4617 | |
Incucyte® pHrodo® 绿色酵母聚糖 Bioparticles® | 查看 | 1 mg | 4618 | |
Incucyte® pHrodo® 红色金黄葡萄球菌 Bioparticles® | 查看 | 2 mg | 4619 | |
Incucyte® pHrodo® 绿色金黄葡萄球菌 Bioparticles® | 查看 | 2 mg | 4620 |
资源
相关文献
一种用于定量巨噬细胞吞噬作用的全新实时成像平台
Researchers at The University of Oxford use Incucyte® live-cell analysis system to quantify phagocytosis with 牛津大学的研究人员使用 Incucyte® 活细胞分析系统定量分析吞噬作用，实现了比现有方法更高的准确度和灵敏度。即使细胞数量稀少或有限，Incucyte® 也能够支持原代吞噬细胞的详细体外研究。Kapellos TS, Taylor L, Lee H, Cowley SA, James WS, Iqbal AJ, Greaves DR doi: 10.1016/j.bcp.2016.07.011