探索单细胞克隆掀起的药物细胞系开发新变革
您是否厌倦了在堆积成山的细胞培养板中接种成千上万个细胞，只是为了辨别这些细胞是否为单细胞、有活力的细胞或者是高产细胞？厌倦了筛选数百个平板只为了找到一个包含所有目标基因并且满足您目标产量的克隆？为什么要让您的药物细胞系开发寄希望于奇迹？借助 CellCelector 全自动无损细胞分离系统，您可以快速有效地评估和验证您的克隆，然后再决定选择哪一个。只需不到一周的时间，即可从单个细胞池中获得大批量单克隆、有活力且高产的克隆体。您现在可以根据实际数据来可靠地预测克隆的未来，不必再以平板数量取胜。这将为您节省耗材和培养基成本、培养箱空间，但非常重要的是，通过避免错误、第二轮克隆和不必要的支出，为达到您的项目目标节省了宝贵的时间。了解更多单克隆细胞筛选信息，欢迎联系我们。
融合了单克隆性证明和活力检测的单细胞克隆筛选分离工作流程
CellCelector 现在可用于高通量单细胞克隆，从而快速生成药物生产细胞系。只需进行一轮克隆，同时工作流程中自动生成可靠的图像验证单克隆性（HT-NIC：基于纳米孔阵列和图像验证的高通量克隆技术）。
凭借对克隆的单克隆性和生存能力的综合快速评估，以及克隆转移到96 或384 孔板后的生长率，CellCelector 单细胞克隆技术代表了下一代单细胞克隆方法。可有效替代有限稀释（LD）、流式细胞分选（FACS）或单细胞打印技术等传统方法。这种具有专利保护的新方法是与 ProBioGen AG 共同开发，并得到其他 CellCellector 客户的一致好评。
CellCelector 纳米孔细胞培养板
HT-NIC 方法基于 CellCelector 纳米孔板 。 这些培养板具有多种不同的规格，每个孔底部有数千个微型的纳米孔。在24 孔板中，每个孔有3000 个纳米孔，整个纳米孔板有72,000 个纳米孔。通过纳米孔有效地将细胞分隔开来。
尽管进行了局部分离，但纳米孔内的细胞被同一种培养基所覆盖，因此出现了有效的细胞共培养。池中的所有细胞将有助于细胞系的生长，同时保持其单克隆性。产品实现了行业领先的单细胞生长率，即使是极难培养的细胞系。
基于纳米孔板的CellCelector单细胞克隆工作流程
细胞铺板方式与传统的细胞培养板相似。铺板后，按照经典的泊松分布在每个纳米孔内随机捕获这些细胞。自动扫描孔，然后自动鉴别包含单细胞的所有纳米孔，提供了一个可靠的基于图像的单克隆性证明。 根据接种的细胞数量，每孔捕获400-600个单细胞，可进行分析。接种多个孔可使您从单个纳米孔中捕获约14,000个单细胞⸺所有这些均在一个纳米孔板内实现。
单克隆性被证明后，细胞将在培养箱中生长3至6天，每个克隆可生长20至75个细胞。与传统的基于甲基纤维素的方法相反，基于CellCelector纳米孔板的方法允许克隆在液体介质中生长。克隆共享相同的介质，但通过纳米孔有效地将它们彼此隔开。当细胞生长为单细胞克隆后，再次扫描纳米孔板并自动选择单克隆性且具有活力的克隆，并将其转移到96或384孔板中进行进一步分析和放大。
全自动单克隆性证明： 纳米孔中可靠的单细胞检测
在传统的单细胞克隆工作流程中，单个细胞被铺到96 孔板中，由于细胞通常位于孔的边缘，很难在明亮的区域进行可靠的自动单细胞检测。因此，通常在克隆生长后的第0 天手动或追溯检查指定克隆的单克隆状态。但是为什么要在一个比单个细胞所占据的表面大100 倍的孔内搜索一个细胞呢？用Cellcelector HT-NIC 方法，细胞被 200 μm的纳米孔分离开来并清晰可见，即使在刚刚铺好板后，或是细胞靠近纳米孔边缘的情况，也可以通过软件自动且准确地识别。
告别有限稀释，CellCelector Flex 提供100% 单克隆性
在有限稀释法（一种成熟的单细胞克隆方法）中，单克隆性基于统计学特性，其概率取决于根据泊松分布植入到每个孔中的细胞平均数量。为了控制单克隆孔的数量，通常每孔播种不超过0.2 个细胞。此外，仅约16% 的孔为单克隆，而其他孔保持空置。因此，要获得400 个单细胞孔，需要播种超过25 个96 孔板。若每孔接种0.5 个细胞，可以使单细胞孔的数量加倍，但代价是非单克隆孔的数量显著增加。
CellCelector HT-NIC 克隆方法通过自动鉴别单细胞纳米孔， 跟踪其生长到克隆，并将生长的克隆无交叉污染地转移到96 孔板中，从而提供100% 的单克隆孔，不依赖于样品制备方法、细胞类型或用于铺纳米孔板的细胞密度。
图片展示了通过CellCelector HT-NIC 克隆法和有限稀释法所获得单克隆孔的概率对比。
使用有限稀释法获得400 个单克隆孔，需要使用26 个96 孔板（0.2 个细胞/ 孔接种密度）或13 个96 孔板（0.5 个细胞/ 孔接种密度）。要达到相同数量的单克隆孔，只需CellCelector 纳米孔板的一个大孔就足够了。
单细胞克隆活率超过90%
有限稀释法仅能实现10%-20%的生长率。其他传统方法如FACS单细胞分选或单细胞打印铺板法可使单细胞在孔内接种率大大提高，但通常流式细胞术伴随高剪切力，并且转移的单细胞存在于大量的培养基中，导致生长率介于30%到64%之间。此外，这些方法需要特定且昂贵的带有外源生长因子的克隆培养基，并且不适合于难以生长的细胞系，因为这些细胞根本无法从单个细胞中生长。
在CellCelector HT-NIC方法中，所有铺孔的细胞共享相同的培养基，通过释放自然生长因子而不损害克隆性，促进彼此的生长。只有在一个克隆被证明是单克隆的并且是高活力的之后，它才会被选中并温和地转移到96孔板中。因为它现在已经是一个可存活的小单克隆团，而不是一个被转移的孤单细胞，它将更容易在转移后的大孔里继续生长。
在严格控制的无菌环境中获取可靠的单细胞克隆
可将 CellCelector 系统置于生物安全柜内，从而在无菌条件下进行试验和克隆转移。可以采用随系统一起提供的标准洁净柜或者定制机柜。为了进一步提高细胞活力和分析稳定性，CellCelector也可安装在细胞孵育箱Flowbox中， 它结合了一个紧凑的层流细胞培养罩，能够实现温度、湿度和二氧化碳控制，以及紫外灯杀菌等功能。
将 CellCelector 单细胞克隆用于细胞系开发的优势
简便易用
- 样品制备简单
- 用户友好型软件，具有专为单细胞克隆而开发的功能
- 无需日常维护
出色性能
- 从单个细胞中获得几乎100%的克隆
- 一轮克隆即同时提供基于图像的单克隆性证明和克隆活力评估
- 将克隆转移至 96 孔板后，细胞存活率高达 95%
值得信赖
- 通过高质量图像稳定且自动地完成非标记单细胞检测，并证明单克隆性以向 FDA 提交
- 几乎100% 选择性回收克隆，无克隆间污染
- 采用一次性毛细管和纳米孔板，避免项目间交叉污染
- 从单细胞到克隆再到转移，实现所有克隆的可追溯性
- 自动化克隆转移质量控制（捕获/失败）
节约成本
- 在 6 天内获得经证实的有活力单克隆性克隆
- 在耗材、培养基和培养箱存储空间方面显著节约成本
- 24 孔纳米孔板的一个孔即可产生 200-500 个靶克隆
- 无需通过额外的成像系统即可完成单克隆评估
灵活性强
- 可兼容多种细胞系（CHO、HEK293；NS0、PER.C6 等）
- 不限制细胞大小
- 可在一个平板内运行多达 24 个样品，易于优化细胞密度或培养基
- 可兼容多种应用工作流程（单个 B 细胞筛选、杂交瘤筛选、基因编辑、稀有单细胞分离等）
- 可兼容标准或定制源容器和目标容器，如微孔板、培养皿、载玻片、过滤器、芯片、PCR板或管
