CRISPR 单细胞克隆

使用 CRISPR/Cas 进行基因编辑:CellCelector 可作为靶向细胞分离和单细胞克隆的理想工具

CRISPR-Cas9 基因组编辑是一种对细胞进行基因修饰的方法。该方法需要使用 Cas9 核酸酶(一种非特异性切割 DNA 的酶)和合成引导 RNA 来转染细胞,其中后者负责引导 Cas9 核酸酶到 DNA 剪切位点。由此产生的双链断裂将激活细胞内在修复系统。通过添加修复模板,同源定向修复 (HDR) 可以在修复过程中插入序列,导致基因敲入突变。在没有修复模板的情况下,细胞通过非同源末端连接 (NHEJ) 实现修复。但 NHEJ 经常引入小片段的缺失或插入,使修复基因序列中断,从而导致基因敲除突变。

然而,CRISPR-Cas9 编辑在不同细胞上可能会得到不同结果,最终生成异质性细胞群。许多实验都要求细胞具有相同的遗传背景。这可以通过单细胞克隆使其携带期望基因来实现。

CellCelector 是该应用的有力工具。赛多利斯与 Probiogen AG 合作开发了一套新的 单细胞克隆方法— HT-NIC 法,此方法在多个方面都胜过了常用的克隆方法,如有限稀释克隆法。有限稀释克隆法需要稀释单细胞使细胞彼此完全分离以达到单克隆性。然而,由于缺乏细胞间通讯,许多细胞可能不耐受单细胞稀释并因此导致细胞大量丢失。我们的新方法可以正确解决这一问题。除此之外,HT-NIC 法还具有大幅节省成本和时间,集成了单克隆性和活力证明功能等优势。了解更多应用于基因编辑技术的产品,请联系我们!

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