守护您的稀有细胞：无论分离或染色，确保无细胞丢失
SIEVEWELL 纳米孔芯片引领基于纳米孔的单细胞分离进入新时代。SIEVEWELL 是一款全新设计的腔室载玻片，其液体腔室底部有额外的纳米孔结构。这些纳米孔每个孔的底部都有 2 个微孔，与下面的一个小液体微腔相连。这样可以捕捉纳米孔内的细胞，并从液室顶部产生单向流动，通过孔隙进入下方的液体微腔。得益于这一设计，用户不仅可以在纳米孔中分隔并捕获单细胞，还可以在孔内直接对这些细胞进行处理，例如抗体标记、单细胞染色、清洗等，无惧丢失任何细胞。这种完全无细胞损失的芯片上处理方式使SIEVEWELL 技术成为稀有单细胞应用的高效之选，可用于分离循环肿瘤细胞、胎儿细胞等。
通过将这种独特的芯片设计与 CellCelector相结合，可以实现全自动化的单细胞鉴定，并可100%分离出所需的靶细胞。
SIEVEWELL：技术细节和特征
设计
- 标准显微镜载玻片规格
- 良好的生物相容性，非细胞毒性材料
- 带纳米孔的薄膜
- 超低吸附表面
- 纳米孔尺寸：20 μm 宽 x 25 µm 深。非常适合高效的单细胞捕获。
每个芯片具有37万个纳米孔（17 x 17毫米）
- 六边形设计的纳米孔是自动化细胞检测和细胞计数的理想选择
- 每个纳米孔底部有两个直径为 2 µm 的微孔，易于通过液体，同时有效地保留细胞
SIEVEWELL 薄膜结构。纳米孔的俯视图。
SIEVEWELL 薄膜结构。纳米孔的侧视图。
SIEVEWELL 的明场图像。纳米孔底部的孔隙清晰可见。
SIEVEWELL 纳米孔芯片的光学性质
- 在显微镜明场下呈现高透明度
- 自发荧光信号极低
得益于这些优势，SIEVEWELL 技术非常适合于显微镜和光学测量，并且可以采集高质量的显微成像数据。
SIEVEWELL：工作原理
SIEVEWELL 芯片共有 37 万个纳米孔，其中每个孔的底部有两个直径为 2 µm 的微孔。它们连接芯片上方和下方的流体部分。纳米孔下方的流体通过位于芯片膜下方的一个液体微腔连接到两侧端口。
将细胞悬液接种到芯片上后，可以通过用标准的微量移液器抽吸液体来产生和控制从内部液室到侧端口的单向流体流。这些细胞将跟随液体流动并被滞留在纳米孔中。当一个细胞进入纳米孔时，它会堵塞微孔，从而减少通过纳米孔的液体流量。因此，其他细胞将自动重定向到其他空的纳米孔，从而实现自隔离纳米孔阵列。细胞装载完成后，可以使用相同的方式对芯片进行染色，确保在固定、破膜、封闭、孵育和洗涤过程中不会造成任何的细胞损失。
SIEVEWELL 无损单细胞分离的芯片染色工作流程
1. 填装细胞
将富集或处理过的单细胞悬液接种到芯片中。SIEVEWELL 技术可兼容活细胞和固定细胞。
第 1 步
将单细胞悬液加入 SIEVEWELL 芯片的腔室中。
第 2 步
从 SIEVEWELL 芯片的侧端口吸出缓冲液。
使用移液器进行抽吸，产生从内部腔室流出的定向液流，并通过纳米孔底部的两个微孔，流向侧端口的移液器。
细胞随着液流向下移动，由于微孔足够小，可以避免细胞通过，因此细胞将在纳米孔内被捕获。
由于纳米孔的大小限制，每孔只能捕获一个细胞。细胞在进入纳米孔后堵塞微孔，减少了液流通过。因此，后续的细胞将自动重定向到周围的、空的纳米孔中，从而实现非常高效的自分选单细胞捕获。
接种至 SIEVEWELL 的 A549 细胞
2. 细胞染色和清洗
加入试剂、孵育、洗涤，细胞染色不丢失。在染色前也可以在装置内先进行固定。
第 1 步
将试剂或清洗液加入 SIEVEWELL 芯片的腔室中。
使用 CellCelector 进行扫描
蓝色：DAPI；绿色：A549 细胞；红色：Namalwa 细胞
纳米孔中捕获的 CTC
第 2 步
从 SIEVEWELL 芯片的侧端口吸出过量的试剂或洗涤缓冲液。细胞被纳米孔捕获，在整个流程中不会丢失。
洗涤后的荧光图像。
3. 检测
使用 CellCelector 扫描芯片以检测靶细胞。细胞固定在纳米孔中，并在扫描过程中保持其原始位置。
由于 SIEVEWELL 芯片高度平整，因此用户可以在不失焦的同时轻松地扫描芯片的整个区域。
用 CellCelector 进行扫描
蓝色：DAPI；绿色：A549 细胞；红色：Namalwa 细胞
纳米孔中捕获的 CTC
4. 靶细胞回收
将靶细胞转移至 PCR 管或细胞培养板中。SIEVEWELL 纳米孔芯片经过专门优化，可与全自动无损细胞分离系统 CellCelector 配合使用。
使用 CellCelector 回收单细胞
分离至目的孔中的 A549 细胞
5. 下游分析
SIEVEWELL 技术兼容单细胞 DNA 二代测序、RNA 测序等分子生物学分析方法。回收后的活细胞可克隆。
使用 GAPDH 的基因特异性引物进行单细胞 RT-PCR。
PC：阳性对照，收集 A549 细胞的 c-DNA
NC：阴性对照，裂解缓冲液
相关参考文献
- Ladurner M. et al. Validation of Cell-Free RNA and Circulating Tumor Cells for Molecular Marker Analysis in Metastatic Prostate Cancer Biomedicines. 2021 Aug 12;9(8):1004
