用于快速、准确、高通量 IgG 定量的 Octet® ProA 和 ProA-MAX 生物传感器
直接测定粗提物、细胞裂解物、细胞培养上清液和复杂基质中的抗体浓度,检测速度快,动态范围广,准确性及重复性高,检测结果与 HPLC 检测数据具备高度相关性。
- 免疫球蛋白(IgG)的直接测定
- 无需纯化或梯度稀释,直接分析粗样本
- 快速获取结果
- 动态范围广
- 准确性及重复性高,检测结果与 HPLC 数据高度吻合
Octet® ProA、ProA‑MAX 生物传感器支持粗提物、细胞裂解物、细胞培养上清、复杂基质的抗体快速定量。直接定量检测模式可在 2 分钟内输出 IgG 滴度结果,还可适配自动化流程,用于高通量筛选工作。
检测结果与 HPLC 数据具有良好相关性,可为工艺开发及分析工作流提供快速、可靠的滴度检测。采用成熟的基于pH的再生方案,生物传感器可再生重复使用,实现高性价比、省时高效的检测模式。
IgG定量方法比较
ProA 与 ProA-MAX 生物传感器、HPLC 以及 UV/Vis A280
本表格对比了 IgG / 蛋白质定量的主流分析方法,从性能表现、检测通量、样本要求、使用成本,以及在科研、生物工艺监控和质量控制(QC)中的典型应用场景多个维度进行说明。
| Octet® ProA 生物传感器 | Octet® ProA-MAX 生物传感器 | HPLC(Protein A 或类似方法) | UV/Vis (A280) | |
|---|---|---|---|---|
| 测定内容 | 通过 Protein A 结合直接测定 IgG 1、2 和 4 | 通过修饰的 Protein A 结合直接测定 IgG 1 和多克隆 IgG | IgG(Protein A 色谱柱)或通过校准峰面积测定特定蛋白质 | 总蛋白;若样品为纯品且消光系数已知,可测定 IgG |
| 操作难度 | 简便 — 检测设置和校准技术门槛低,准备好样品板即可轻松完成检测 | 简便 — 检测设置和校准技术门槛低,准备好样品板即可轻松完成检测 | 难度‑中低:涉及方法开发、色谱柱维护、系统集成与校准工作;需要具备色谱相关专业技术能力 | 简便 — 操作步骤简单,移取样品后直接测定A280值(280 纳米紫外吸光度) |
| 典型检测时间(每板/每次运行) | 96 孔板 2-30 min(取决于仪器) | 96 孔板 2-30 min(取决于仪器) | 25 min/样品(通常 1-10 个样品,取决于进样序列);梯度方法耗时更长 | 单个比色杯样本:单样本检测仅需数秒;微孔板整板检测则为数分钟 |
| 实操耗时 | 低–中:上板、配制标品 / 样品;单轮操作工作量小 | 低–中:上板、配制标品 / 样品;单轮操作工作量小 | 中–高:样品前处理、进样瓶装载、方法设置、跑完后数据处理 | 极低:移液后直接读数 |
| 通量 | 高 | 高 | 低 | 高 |
| 每个样本的检测成本 | 低 | 低 | 较高 | 极低 |
| 检测下限 | <1 μg/mL | 10 μg/mL | ≤ 1 μg/mL | 50–100 μg/mL |
| CV%(批内精度) | 良好条件下 IgG 定量 CV 通常 < 10% | 良好条件下 IgG 定量 CV 通常 < 10% | 方法良好且校准得当,IgG 峰面积 CV 通常约 1%-5% | 移液精确且样品洁净时,CV 通常约 1%-5%;基质干扰时 CV 更高 |
| 复杂基质中 IgG 的准确度 | 性能优异:Protein A 对 IgG 特异性高,即便在粗样本 / 条件培养基中仍可实现识别;实验需完成恰当校准 | 性能优异:Protein A 对 IgG 特异性高,即便在粗样本 / 条件培养基中仍可实现识别;实验需完成恰当校准 | 性能优异:色谱分离 + 校准;QC 中的标准方法 | 较差 — 基质依赖性较强;仅对消光系数已知且相对纯净的 IgG 才准确 |
| 动态范围 | 2–5 个数量级 (0.025–2000 µg/mL) | 2–3 个数量级 (100–12,000 µg/mL) | 校准得当且检测器线性良好时约 2–3 个数量级 | 通常 2–3 个数量级;IgG 通常约 0.05–20 mg/mL,取决于仪器 |
| 样品体积要求 | 低 — 每孔/样品通常约 50–200 µL | 低 — 每孔/样品通常约 50–200 µL | 低 — 每次进样约 10–100 µL,另加稀释所需体积 | 极低 — 数 µL(微量)至 50–100 µL(比色皿);孔板每孔约 200 µL |
| 方法开发工作量 | 低 — 需要优化缓冲液、再生、上样时间、标准曲线等 | 低 — 需要优化缓冲液、再生、上样时间、标准曲线等 | 高:方法开发、色谱柱选型、梯度优化、稳定性验证 | 极低 — 基本只需设置光程和缓冲液空白 |
| 高通量筛选适用性 | 优异 — 专为 96–384 孔规格的高通量 IgG 滴度和结合筛选设计 | 优异 — 专为 96–384 孔规格的高通量 IgG 滴度和结合筛选设计 | 有限 — HPLC 可自动化,但样品量非常大时速度较慢,可扩展性较差 | 适合快速粗略定量;孔板式检测通量高 |
| 法规/QC 适用性 | 在开发/QC 中的应用日益广泛 | 在开发/QC 中的应用日益广泛 | 多种 QC 环境中定量分析的金标准 | 更多用于工艺检查和配方;不是复杂样品的主要质控释放方法 |
| 关键优势 | 快速、特异性 IgG 定量,高通量,兼容粗基质 | 快速、特异性 IgG 定量,高通量,兼容粗基质 | 准确度高、特异性好、稳健,在受监管环境中获得广泛认可 | 成本最低、操作最简单、速度非常快;耗材极少 |
| 主要局限 | 存在耗材(生物传感器)成本;需定期校准与维护 | 存在耗材(生物传感器)成本;需定期校准与维护 | 通量偏低,方法复杂、成本更高,维护工作量大 | 选择性差、易受基质干扰;依赖样品纯度与消光系数 |
选型建议
Protein A 生物传感器
最适用场景:克隆筛选、细胞株开发、工艺开发及试验设计(DoE)实验中的高通量 IgG 滴度测定。
核心价值:检测速度快、IgG 特异性强、支持粗样本直接分析(无需纯化或系列梯度稀释);无论粗样本还是纯化样本,均可实现高准确度检测。
HPLC
最适用场景:质量控制 / 批次放行、稳定性研究,这类场景对法规合规可靠性与特异性有严苛要求。
核心价值:定量结果可信度极高、具备色谱分离能力、可采用可溯源校准。
UV/Vis
最适用场景:纯化 IgG 或蛋白的浓度快速核验;制剂研究及常规实验室工作,不适用于对复杂基质样本有高准确度要求的场景。
核心价值:成本低、操作简便、检测响应速度极快。
购买 ProA 生物传感器
相关资源
- 选择指南:Octet® 生物传感器 PDF | 1.4 MB
- Datasheet: Protein A Biosensors PDF | 492.6 KB
- Poster: Dynamic Binding Capacity Of Resins Using Biolayer Interferometry PDF | 231.5 KB
- Poster: High Throughput Bio Layer Interferometry In Therapeutic Antibody Discovery PDF | 456.1 KB
- CaptureSelect Affinity Ligands for Antibody Detection and Characterization PDF | 1.3 MB
- 一种快速、高精度的流感疫苗效价测定方法 PDF | 687.7 KB
- Application Note: Fast Quantitation of Proteins and Antibodies Using BLItz System PDF | 350.2 KB
- Technical Note: Residual Protein A Detection Kit PDF | 1.8 MB