利用实时活细胞分析了解 B 淋巴细胞的特异性免疫

B 淋巴细胞

B 细胞在特异性免疫系统中发挥中心作用,负责产生针对入侵性病原体的抗原特异性免疫球蛋白。B 细胞的激活和增殖对抗体分泌至关重要,但持续性刺激也会导致 B 细胞白血病和淋巴瘤细胞的存活和生长,如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。

Incucyte®实时活细胞分析系统已被用于评估 B 细胞的关键功能,包括细胞活化和聚集,抗体内化,以及通过细胞凋亡评估 B 细胞肿瘤的细胞凋亡,和免疫细胞杀伤实验。


了解更多信息

了解免疫学

活化和聚集

非贴壁B 细胞系的增殖。通过相差图像对 WIL-2NS 细胞(一种 B 细胞系)的增殖进行定量。 与预期一致,起始汇合度由接种密度决定。 通过向每个加样孔中接种已知数量的细胞,等待沉降后进行定量分析,完成汇合度测量的验证。然后,对细胞进行渗透处理,测定三磷酸腺苷 (ATP) 的含量,提供二次读数。研究发现,汇合度和细胞数量或 ATP 测定之间存在很强的相关性。

细胞凋亡(Annexin V 绿色染料)

检测 B 细胞在细胞毒性实验后的凋亡情况。在 Incucyte® Annexin V 绿色染料的存在下,获取 WIL2-NS B 淋巴瘤细胞经溶剂或喜树碱 (1 µM) 处理 24 小时后的代表性图像。时间进程曲线显示,Incucyte®  Annexin V 绿色染料发出的绿色荧光增加,表明喜树碱诱导的细胞膜表面磷脂酰丝氨酸呈时间和浓度依赖性增加。

免疫细胞杀伤

测定白血病细胞的抗体依赖性细胞毒作用 (antibody dependent cellular cytotoxicity, ADCC)。存在免疫细胞时(未处理,或存在 IL-2 (10 ng/mL) 和 IL-12 (10 ng/mL) 或美罗华 (Rituxan) (15 ng/mL - 100 µg/mL)),表达 NucLight®红色核标记物的 Ramos B 淋巴细胞的相位和荧光融合图像。可根据红色荧光强度的损失来定量细胞毒性。

定量抗体内化

临床上使用的抗体美罗华 (Rituxan) 的内化。使用 Incucyte® FabFluor 标记的美罗华(10 ng/mL 至 10 µg/mL)处理 Raji 细胞(B 细胞样)(30, 000个/孔)。使用 20 倍物镜在 12 小时内每 30 分钟采集一次高清相位和红色荧光图像。所有数据显示为至少 4 孔的平均值 ± SEM,时间进程数据显示为归一化的红色区域(红色区域/相位区域)。

联系我们

联系我们