Octet® DYKDDDDK 生物传感器
- 对 Flag® 标签具有高特异性，粗制样品和纯化样品皆可分析
- 配体固化能力强，灵敏度高
- 定量动态范围广：0.5-100 μg/mL
- 定量分析的典型精度： CV <10%
- 生物传感器的再生效率和成本效益高，可重复使用至多 10 次
简介
Flag® 标签（也写作 FLAG® 标签或 DYKDDDDK 标签）是一种合成表位/肽标签，并非源自天然蛋白质。它能够灵敏地捕获和检测蛋白质，适用于蛋白质纯化、ELISA、流式细胞术、免疫荧光 (IF)、免疫沉淀 (IP) 和蛋白质印迹 (WB) 等工作流程。这种八肽标签的序列是 NH2-DYKDDDDK-COOH (Asp–Tyr–Lys–Asp–Asp–Asp–Asp–Lys)，并且带有肠激酶酶切位点 (DDDDK)，因此可在纯化后精准去除标签。Flag® 标记的蛋白质可被 ANTI-FLAG® 抗体特异性识别，该标签可以在 DNA 质粒中同框克隆到目标蛋白质的 N 端或 C 端，以便通过转染进行重组表达。
Hopp 等人于 1988 年首次提出了 1× Flag 标签 (1)，这种标签由 8 个氨基酸组成，分子量约为 1012.98 Da；另一种高灵敏度的 3× Flag 变体也应用广泛，该标签通常采用经过优化的 DYKDHDG–DYKDHDI–DYKDDDDK 序列，而不是简单的重复序列。无论是用于抗体检测、重组蛋白纯化，还是简化分析方法开发，Flag® 标签都能在克隆到纯化的每个环节充分发挥性能稳健、功能丰富的优势。
Flag® 标签被认为具有高特异性，Flag® 序列与相应抗体结合的解离常数 (KD) 约为 100 nM (2)。Octet® DYKDDDDK 生物传感器可以结合这种短链亲水标签，因此适用于蛋白-蛋白相互作用研究。
这些生物传感器具有高结合载量、灵敏度和广泛的动态范围，可再生多达 10 次，适用于动力学和定量分析，同时保持测量的一致性和精确性。这些特性使其成为高通量应用的性价比之选，包括先导物的识别和优化、细胞系开发、工艺开发、以及粗蛋白和纯化蛋白样品质控。
(1) Hopp, T., Prickett, K., Price, V. et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Nat Biotechnol 6, 1204–1210 (1988). https://doi.org/10.1038/nbt1088-1204
(2) Einhauer, A & Jungbauer, A. (2001). Affinity of the monoclonal antibody M1 directed against the FLAG peptide. Journal of chromatography. A. 921. 25-30. https://doi.org/10.1016/S0021-9673(01)00831-7
特色资源
常见问题解答
如果您需要对重组蛋白进行高特异性的抗体捕获，以获得信号清晰、背景干净的检测结果，请使用 FLAG® 标签，尤其是在纯度比产量更重要的情况下。
使用 FLAG® 标签的主要原因：
- 高纯度，低背景信号：ANTI-FLAG® 抗体的亲和力具有高特异性，制备物纯度通常比基于电荷的 His 标签/IMAC 方法更高 (1)。如果污染物会与 His 标签共纯化，这个优势尤其有价值。
- 纯化膜蛋白的理想之选：通常推荐用于膜蛋白纯化，因为对于这类纯化，高纯度比高产量更加重要。
- 纯化速度快、灵活性高：其工作原理是将 FLAG® 融合到 N 端或 C 端，然后使用琼脂糖或磁珠上的 ANTI-FLAG 单克隆抗体捕获蛋白。
- 广泛支持多种检测和分析：ANTI-FLAG® 抗体既可用于检测表达（使用 Octet® BLI 分析方法），又可用于免疫沉淀工作流程。
- 新型树脂提升实用性：新型 ANTI-FLAG® 树脂价格更实惠、可耐受低 pH 洗脱，且使用寿命更长，因此可重复使用的次数更多、成本效益更高。
- 提示：FLAG® 标签的产量通常低于 His 标签，但特异性和产物纯度更高。
(1) Spriestersbach, Anne & Kubicek, Jan & Schaefer, Frank & Block, Helena & Maertens, Barbara. (2015). Purification of His-Tagged Proteins. Methods in enzymology. 559. 1-15. https://doi.org/10.1016/bs.mie.2014.11.003 .
将 FLAG® 标签融合到蛋白质的 N 端或 C 端（最佳选择取决于蛋白质，因此两端都需要测试）。纯化时，可使用 ANTI-FLAG® 抗体偶联的琼脂糖或磁珠捕获标记蛋白；串联使用 FLAG® 标签可以提高捕获率和纯度，在纯度比产量更重要的膜蛋白纯化中，该方法尤其有用。按照供应商提供的结合、清洗和洗脱方案进行操作；使用 FLAG 肽进行竞争性洗脱或采用低 pH 条件进行洗脱（如果树脂支持）。新型 ANTI-FLAG® 树脂价格更实惠、可耐受低 pH 洗脱，且使用寿命更长。
Octet® DYKDDDDK 生物传感器包被有 ANTI-FLAG® 抗体，可捕获 FLAG 标记蛋白作为纯净、定向的配体用于测量蛋白质相互作用。这种基于抗体的捕获方法具有高特异性，由于表位小，通常能保持活性，并且可以在低 pH 条件下再生。良好实践是使用非 FLAG® 蛋白（阴性对照）和/或同型对照表面作为对照，用于评估非特异性结合。
FLAG 是 Merck KGaA（德国达姆施塔特）的注册商标，ANTI-FLAG 是 Sigma-Aldrich Co. LLC 的商标。