评估 NK 细胞的功能和表型

使用 Incucyte^® 测定肿瘤球中的 ADCC效应。免疫细胞存在时（未处理条件下，或存在抗-CD3 （10 ng/mL） 和 IL-2 （10 ng/mL） 或赫赛汀 （0.08 ng/mL - 50 µg）），SKOV-3 Incucyte^® NucLight 红色肿瘤球的相位和荧光融合图像。可根据红色荧光强度来定量细胞毒性。图中数据显示了激活的 T 细胞群和赫赛汀诱导的细胞毒性对肿瘤球产生的破坏作用。

自然杀伤细胞介导的抗体依赖性细胞毒性作用，可诱导浓度依赖性靶细胞的死亡和颗粒酶的产生。

编码的 Raji 肿瘤细胞 (2×10⁴个/孔) 与来自两个单独供体的 PBMC (2×10⁵个/孔) 共培养。PBMC 分别与以下三个抗CD20 抗体之一共同孵育：Ab-1 (IgG1)、Ab-2 (IgG1) 或阴性对照 Ab-3 (IgA2)。浓度范围在 10 μg/mL - 0.128 ng/mL 之间。

4 小时后，使用人 NK 细胞杀伤分析试剂盒和 iQue^® 3 分析 10 µL 样品，以评估肿瘤细胞杀伤情况，同时还使用 iQue^® 人 NK 细胞配套试剂盒测定了颗粒酶 A。(A,B) 来自两个供体的靶细胞杀伤对抗体的响应不同。(C,D) 两个供体细胞颗粒酶 A 的产生都呈现出浓度和供体依赖性。(E,F) NK 细胞上 CD16 的检出量随抗-CD20 抗体浓度的增加而降低。这可能是由 CD16 的脱落或 CD20 抗体的竞争导致。

细胞因子刺激增强了 NK 细胞介导的肿瘤细胞直接杀伤作用。将编码的 K562 肿瘤细胞 (2×10⁴个/孔) 与富集的（阴性选择）人 NK 细胞共培养，人 NK 细胞已在单独培养基（非活化 NK 细胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 细胞）的培养基中孵育 16-18 小时，效靶比为 1:1 或 5:1。在 4 小时和 24 小时后，使用 iQue^® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒和 iQue^® 3 对 10 µL 样品进行分析，以评估肿瘤细胞的杀伤作用。(A) 直方图显示了靶细胞在与非活化或细胞因子激活的 NK 细胞共培养 4 小时后的活性。(B,C) 图中汇总了在与非活化或细胞因子激活的 NK 细胞共培养 (B) 4 小时或 (C) 24 小时后死亡肿瘤细胞的百分比。

靶细胞的存在会诱导 NK 细胞的活化，并通过细胞因子刺激进一步增强。将编码的 K562 肿瘤细胞 (2×10⁴个/孔) 与富集的（阴性选择）人 NK 细胞共培养，人 NK 细胞已在单独培养基（非活化 NK 细胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 细胞）的培养基中孵育 16-18 小时，效靶比为 5:1。在共培养 24 小时后，取出 10 µL 样品，使用 iQue^® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒和 iQue^® 3 进行分析。(A) 活化标志物（CD69 和 CD25）的表达情况。(B) IFNg 的产生和颗粒酶 B 的分泌情况。(C) 将 iQue^® 人 NK 细胞配套试剂盒和 iQue^® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒相结合，对其他额外的细胞因子进行平行评估。  NK = 自然杀伤细胞。T = K562 肿瘤靶细胞。

IL-2 和 IL-15 活化后，多种效应蛋白（如颗粒酶 B 和 CCL5 (RANTES)）的表达和分泌增加。这些作用在靶细胞和 NK 细胞共培养时进一步增强。