从生理学相关的模型中获得 NK 细胞介导的肿瘤细胞杀伤相关的生物学启示
自然杀伤细胞介导的抗体依赖性细胞毒性作用,可诱导浓度依赖性靶细胞的死亡和颗粒酶的产生。
编码的 Raji 肿瘤细胞 (2×104个/孔) 与来自两个单独供体的 PBMC (2×105个/孔) 共培养。PBMC 分别与以下三个抗CD20 抗体之一共同孵育:Ab-1 (IgG1)、Ab-2 (IgG1) 或阴性对照 Ab-3 (IgA2)。浓度范围在 10 μg/mL - 0.128 ng/mL 之间。
4 小时后,使用人 NK 细胞杀伤分析试剂盒和 iQue® 3 分析 10 µL 样品,以评估肿瘤细胞杀伤情况,同时还使用 iQue® 人 NK 细胞配套试剂盒测定了颗粒酶 A。(A,B) 来自两个供体的靶细胞杀伤对抗体的响应不同。(C,D) 两个供体细胞颗粒酶 A 的产生都呈现出浓度和供体依赖性。(E,F) NK 细胞上 CD16 的检出量随抗-CD20 抗体浓度的增加而降低。这可能是由 CD16 的脱落或 CD20 抗体的竞争导致。
细胞因子刺激增强了 NK 细胞介导的肿瘤细胞直接杀伤作用。将编码的 K562 肿瘤细胞 (2×104个/孔) 与富集的(阴性选择)人 NK 细胞共培养,人 NK 细胞已在单独培养基(非活化 NK 细胞),或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15(已活化 NK 细胞)的培养基中孵育 16-18 小时,效靶比为 1:1 或 5:1。在 4 小时和 24 小时后,使用 iQue® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒和 iQue® 3 对 10 µL 样品进行分析,以评估肿瘤细胞的杀伤作用。(A) 直方图显示了靶细胞在与非活化或细胞因子激活的 NK 细胞共培养 4 小时后的活性。(B,C) 图中汇总了在与非活化或细胞因子激活的 NK 细胞共培养 (B) 4 小时或 (C) 24 小时后死亡肿瘤细胞的百分比。
同时进行 NK 细胞表面蛋白和细胞因子表达的定量测定
靶细胞的存在会诱导 NK 细胞的活化,并通过细胞因子刺激进一步增强。将编码的 K562 肿瘤细胞 (2×104个/孔) 与富集的(阴性选择)人 NK 细胞共培养,人 NK 细胞已在单独培养基(非活化 NK 细胞),或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15(已活化 NK 细胞)的培养基中孵育 16-18 小时,效靶比为 5:1。在共培养 24 小时后,取出 10 µL 样品,使用 iQue® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒和 iQue® 3 进行分析。(A) 活化标志物(CD69 和 CD25)的表达情况。(B) IFNg 的产生和颗粒酶 B 的分泌情况。(C) 将 iQue® 人 NK 细胞配套试剂盒和 iQue® 人 NK 细胞杀伤分析试剂盒相结合,对其他额外的细胞因子进行平行评估。 NK = 自然杀伤细胞。T = K562 肿瘤靶细胞。
IL-2 和 IL-15 活化后,多种效应蛋白(如颗粒酶 B 和 CCL5 (RANTES))的表达和分泌增加。这些作用在靶细胞和 NK 细胞共培养时进一步增强。
资源和产品
可供进一步参考的资料:
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Incucyte® 和 iQue® 的代表性文献
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