神经肿瘤学概述

图 1. 在 SH-SY5Y 成神经细胞瘤细胞模型中，mTOR 抑制剂 PP242 可影响细胞健康。将 SH-SY5Y 胶质母细胞瘤细胞接种到 96 孔板中（5,000 个细胞/孔），在含 Incucyte^® Annexin V NIR (0.5%; artorius) 的培养基中培养 3 天后，用 mTOR 抑制剂 PP242 (50-0.21 μM) 处理。使用 Incucyte^®实时活细胞分析系统实时获取相位和荧光图像。典型图片显示了用 PP242 (16.7 µM) 和溶剂分别处理 72 小时后的比较结果。时间进程和药物反应曲线显示，细胞汇合度呈浓度依赖性下降，细胞死亡相应增加 (pIC50 4.8)。数据表示为平均值 ± SEM（3 次重复测定）。

图 2. 实体脑肿瘤 3D 肿瘤球生长速度和面积的形态学差异。将成神经细胞瘤 (SH-SY5Y) 和成胶质细胞瘤 (U87-MG) 细胞分别接种到 96 孔圆底孔板中（5,000 细胞/孔），然后等待细胞形成单肿瘤球（3 天）。在 Incucyte^®中监检测肿瘤球的形成和生长 10 天。图 (A) 中显示了肿瘤球形成 7 天后的代表性的明场图像和分割 mask（蓝色轮廓）。图 (B) 中显示了肿瘤球形成后的时间进程曲线图，表明两种细胞肿瘤球的生长速度和面积有所不同，SH-SY5Y 的面积略大于 U87，面积分别为 6.6 × 105 µm² 和 5.0 × 105 µm²。图 (C) 中显示了量化后的单球体偏心率，结果表明：U87 肿瘤球一经形成，即呈现圆球状、紧凑且保持低偏心率（第 1 天为 0.33，第 7 天为 0.31），而 SH-SY5Y 肿瘤球偏心率较高（第 1 天为 0.55，第 7 天为 0.78），随着时间的推移，细胞增殖，肿瘤球的密实程度有所下降。数据表示为平均值 ± SEM（12 次重复测定）。

图 3. 人源成胶质细胞瘤 U87 单球模型的验证和稳定性。(A) 将稳定表达 Incucyte^® Nuclight-Orange 的 U87-MG 细胞以不同的密度（1,000-7,500 细胞/孔）接种到 96 孔板中，并在 Incucyte^® 中监测其形成情况 3 天。(B) 使用橙色荧光数值观察到接种的高度稳定性和球体区域的密度依赖性差异。数据表示为平均值 ± SEM，并显示 CV% 值。(C) 细胞接种并形成单球体后的明场和橙色荧光图像（7,500 细胞/孔，3 天），并使用橙色分割 mask（红色轮廓）。

图 4.化疗化合物在细胞抑制和细胞毒性作用方面的差异。将成胶质细胞瘤 (U87-MG) 细胞接种到 96 孔圆底孔板（5,000 细胞/孔）中，等待细胞形成肿瘤球（3 天），在 Incucyte^® 中监测 10 天。(A) 肿瘤球形成后，在Incucyte^® Annexin V NIR  存在的情况下，使用 DNA 抑制剂 Cisplatin (0.82 - 200 μM) 或双重 mTOR 抑制剂 PP242 (0.21 - 50 μM) 处理细胞。(B) 时间进程曲线显示了在明场区域中，肿瘤球在 Cisplatin (200 µM) 和 PP242 (50 µM) 的最高浓度下，相较溶剂空白组的变化。(C) 时间进程数据和药物反应曲线表明，PP242 具有很强的细胞抑制作用，但只有在较高浓度下才会发生细胞凋亡，而 Cisplatin 则表现出较高的细胞毒性。数据表示为平均值 ± SEM。

图 5. 高通量研究化合物对成胶质细胞瘤肿瘤球侵袭的影响。将 U87-MG 细胞接种到  96 孔圆底板中（2,500 细胞/孔），等待其形成肿瘤球（3 天）。然后用一系列稀释的抗转移化合物处理肿瘤球，并将其埋入 Matrigel (4.5 mg/mL) 以诱导侵袭（长达 10 天）。(A) Incucyte^®微孔板图中显示了3天处理后对肿瘤球侵袭的结果（整个肿瘤球区域；黄色轮廓 mask）。(B) 细胞松弛素 D (2.34 nM - 300 nM) 和 PP242 (0.01 μM - 30 μM) 对 U87-MG 肿瘤球侵袭的抑制呈浓度依赖性，而 Blebbistatin (0.01 μ M - 30 μ M) 对 U87-MG 肿瘤球侵袭的抑制作用不大。