用于病毒载体基因传递的实验室工具
病毒载体基因传递是将外源遗传物质插入靶细胞的常用方法之一。在嵌合抗原受体 (CAR) T 细胞治疗中，慢病毒载体是首选方法，因为它们具有高效、稳定和多功能性的优点。
然而，这一过程中还存在一些尚待解决的挑战，例如转导效率的优化、载体关键质量属性的纯化和表征。
为此，赛多利斯提出通过正交技术来简化慢病毒载体的研发和实验室规模生产：
- 通过创新、快速的基于图像的检测方法来确定感染滴度
- 快速、一步式完成慢病毒载体的收获和澄清
- 开发用于慢病毒生产的包装细胞系
Incucyte® 活细胞分析平台
这是一个连续、实时的活细胞成像和分析平台，研究人员无需从孵育箱培养箱中取出细胞或干扰培养物即可进行分析。
- 可以分析细胞特异性和随时间变化的生物学活性
- 可以通过细胞图像和视频进行结果的可视化和验证
- 系统可自动采集和分析细胞图像，为无人值守提供便利
精选应用：快速准确测定慢病毒感染滴度
病毒载体样品的功能性感染滴度测定非常重要，载体质量控制是病毒载体工艺开发和生产的重要瓶颈。
我们开发了一种创新的、基于实时成像的方法，那就是使用 Incucyte® 活细胞分析系统来量化抗 CD19 CAR 慢病毒载体的感染滴度。
相关应用指南：慢病毒滴度测定的实施活细胞分析
Sartoclear ® Dynamics Lab
适用于收获具有高细胞密度的哺乳动物细胞培养物的一步式方法。滤膜采用硅藻土 (DE)，可以有效解决以下的 CAR-T 工作流程挑战：
- 快速过滤
- 安全操作
- 保留病毒活性
精选应用：实验室规模收获和澄清慢病毒载体
高效收获慢病毒可以消除主要污染物并降低溶液的浊度，同时保持 CAR-T 工作流程中至关重要的载体活性。该方法大幅提高了慢病毒颗粒回收率和感染滴度。
科学家们可以通过瞬时转染 HEK293T/17 SF 悬浮细胞产生慢病毒载体，并使用 Sartolab® RF50 和 Sartoclear Dynamics® Lab V50 完成澄清操作。
用于病毒纯化和质粒 DNA 分离的试剂盒和 IEX 装置
Vivapure® Lentiselect 和 Adenopack
慢病毒和腺病毒纯化试剂盒采用了膜层析法，可以从 20 至 1,000 mL 细胞培养物中快速安全地纯化病毒。 凭借其高产量和低内毒素水平，已成为细胞检测等下游应用的理想选择。
- 即用型试剂盒，包含纯化所需的缓冲液和耗材
- 只需几个小时即可纯化和浓缩病毒载体
- 无需耗时的超速离心
Sartobind® Lab 或 Vivapure® D Units
用于从宿主细胞蛋白、RNA 和染色体 DNA 中分离和纯化质粒。
该膜层析装置上的离子交换能够快速分离质粒 DNA，达到足够的纯度，用于限制性酶内切和测序
CellCelector 自动细胞筛选和分离平台
一套全自动细胞成像和分离系统，用于检测、筛选和分离单细胞、细胞集群、肿瘤球、类器官、单细胞克隆团和贴壁集落。
集成了单克隆性证明的单轮单细胞克隆和细胞系开发，可用于慢病毒包装和细胞系生产。
CellCelector 具有专为从半液体培养基（例如甲基纤维素）和固体培养基（例如琼脂）中挑取细胞集落而开发的半固体培养基挑取模块，是自动筛选和分离细菌菌落的理想解决方案。
相关出版物：
Broussau, S., Lytvyn V., Simoneau M. et al:
Packaging cells for lentiviral vectors generated using the cumate and coumermycin gene induction systems and nanowell single-cell cloning. Molecular Therapy: Methods & Clinical Development Vol. 29 June 2023 57
CAR-载体制备和测试的优势
Sartoclear Dynamics® Lab V50 和 Sartolab® RF50 过滤装置可一步澄清用于生产慢病毒的 HEK293T 培养物，省去离心步骤从而缩短处理时间。该方法在慢病毒颗粒回收率方面也取得了 87% 的优异结果。
Incucyte® 活细胞分析系统提供快速、非侵入性且简便的方法，可以对抗 CD19 CAR 慢病毒载体的感染滴度进行高通量功能定量。实时动态读数和集成软件能够追踪转导细胞存活情况随时间的变化，并确定最佳读数时间点。
Sartoclear Dynamics® Lab 的哺乳动物细胞培养物澄清功能和 Vivapure® 的质粒 DNA 膜层析功能 - 以及慢病毒纯化和浓缩试剂盒 - 为研究人员提供快速、安全且易于使用的解决方案。根据您的样品量选择最方便的试剂盒！
CAR-载体制备和测试资源
常见问题解答
Incucyte® Titer Assay 的实用性已通过一项稳定性研究得到阐述，该研究测试了一系列物理条件对病毒感染性的影响。LV 滴度在四个冻融循环后保持不变，我们可以在 DSP 步骤之间将 LV 存储在 -80 ℃ 下，以供将来的分析测试。研究可能影响感染滴度的过程参数对于维持病毒载体的感染潜力至关重要。
Sartoclear Dynamics® Lab V50 不需要离心步骤，可以减少处理时间，有利于快速处理。此外，Sartolab® RF50 具有出色的过滤装置设计，可通过较大的过滤面积尽可能降低病毒材料溢出的风险，让操作更安全。研究人员可以将其与 MultiStation 并行使用，从而实现高达 87% 的慢病毒颗粒回收率。
慢病毒纯化和浓缩试剂盒为需要回收纯化重组慢病毒颗粒以进行体外转染的研究人员提供了快速、安全且易于使用的解决方案，支持样品量高达 4 – 5 × 109/mL。
赛多利斯提供三种试剂盒规格用于纯化和浓缩 VSV-G 假型慢病毒，分别对应 40 mL、500 mL 或高达 1 L 的细胞培养物，可收获 8 × 108 至 1 × 1010 的高滴度感染颗粒。
在开发细菌细胞系的过程中，生产工艺的自动化对于提高通量和优化产量非常有益。CellCelector 具有专为从半液体固体培养基（例如甲基纤维素）和固体培养基（例如琼脂）中挑取细胞集落而开发的半固体培养基挑取模块，能够自动选择筛选和分离阳性细菌菌落，用于评估和进一步的下游处理。
