增强CAR-T细胞的表型、工程、变异性控制和可靠性

收获 | 临床试验和 IND

在进入后期临床试验并提交 IND 申请之前，根据 FDA 指南 “应在早期临床试验中研究多个版本的细胞或基因治疗产品”，对多个版本的 CAR-T 细胞治疗产品进行评估。  为确保患者安全，必须证明每种产品变体的安全性和生物活性。

Incucyte^® 活细胞分析 and iQue^® 高通量流式细胞仪 均支持毒理学研究。

体外表征和生物安全性检测

我们不仅需要在最终放行时进行 T 细胞表征和安全性测试，还需要在发现和开发的多个阶段进行过程中检测。

这些过程通常具有时间敏感性，因此需要采取快速解决方案。实时筛选和分析解决方案能够连续进行表型和功能分析，而无污染的系统加上快速的检测选项有助于确保安全性。

收获 | 配制 | 灌装

临床规模扩增后，在严格控制的环境下，温和地收获细胞，浓缩并灌装至一次性袋子中。

确保患者安全至关重要。生物安全性检测——快速微生物和真菌无菌检查和支原体检测 ，是综合检测组合的关键组成部分。

激活和扩增

在扩增阶段，工程 CAR-T 细胞在密闭的自动化生物反应器系统（如 Ambr^®15 细胞培养系统和 Ambr^® 250 Modular 系统 ) 中离体培养，可快速鉴别并优化关键工艺参数和关键质量属性 (CQA)。在此阶段，使用 Incucyte^® 活细胞分析 和 iQue^® 高通量流式细胞仪 密切监测关键 CQA，包括 T 细胞耗竭的活化状态、增殖、活力和表型以及 T 细胞群杀伤能力的记忆和功能。

白介素-2 (IL-2) 和白介素 (IL-7) 等细胞因子支持 T 细胞活化和理想表型的扩增。

T 细胞转导

慢病毒载体是将各种 CAR 构建体递送到免疫细胞中的一种最常用的载体。我们针对实验室规模工作流程的解决方案包括：

• HEK293 培养物的快速收获和慢病毒纯化解决方案
• 多种表征和 QC 检测试验，如测定 T 细胞转导效率和效价
• Incucyte^® 活细胞分析平台用于检测转导效率
• Octet^® 非标记生物分子相互作用分析平台 用于测定效价和结合动力学

CAR 设计和构建体筛选

嵌合抗原受体 (CAR) 经过设计特异性靶向癌细胞抗原，增强 T 细胞增殖和细胞毒性。靶标特异性和 T 细胞生命周期是治疗成功的关键因素。对此，我们可以通过以下方式测量：

• 使用 Octet^® 非标记生物分子相互作用分析平台 筛选工程构建体
• 使用 iQue^® 高通量流式细胞仪 验证表型 CAR 构建体匹配情况
• 使用 Incucyte^® 活细胞分析平台 对 CAR 构建体匹配结果进行功能表征

T 细胞活化

T细胞活化的方法不止一种（使用初级和共刺激信号），因此可能会产生不同的活化强度。量化激活谱和表征信号通路有助于简化研究过程。

以下分析可以在此阶段为您的研究提供支持：

• 使用 iQue^® 高通量流式细胞仪进行 T 细胞活化和细胞因子谱分析 
• 使用 Incucyte^® 实时活细胞分析系统 进行 T 细胞表征、细胞移动和活力测定

T 细胞选择和富集

从患者（自体治疗）或供体（同种异体治疗）中分离 T 细胞后，必须仔细筛选和富集，以增加细胞计数并提高产品特异性。基于细胞的体外试验， 如 iQue^®  细胞计数和活力试剂盒 以及 免疫细胞活化和增殖分析——为决策提供了关键见解。

此外，原材料的 快速无菌和支原体检测 是降低污染风险的关键步骤。